三种鸡马立克氏病疫苗的攻毒保护试验比较研究

种鸡马立克氏病疫苗的攻毒保护试验比较研究　孙玉章　，代永联。，吴光玉　，衣服德　，王永玲　（１．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛２６６０３２；　２．青岛市畜牧兽医研究所，山东青岛２６６１００；　３．科尔沁右翼中旗动物卫生监督所，内蒙古兴安盟０２９４００）　摘要：为比较３种商品化马立克氏病疫苗的免疫效果，本研究将１５０只１日龄ＡＡ＋肉鸡随机分为攻毒对照组、　乾元浩疫苗组、梅里亚疫苗组、瑞普疫苗组和空白对照组５组，并按厂家说明剂量进行马立克氏病疫苗免疫。８　日龄时进行马立克氏病超强毒Ｍｄ５株攻毒，每天观察各组临床症状，对病死鸡进行剖检和病理组织学观察。根　据免疫攻毒后的临床观察、剖检病变和病理切片等综合分析，梅里亚疫苗组的保护指数略高于乾元浩疫苗组和　瑞普疫苗组，差异不显著（Ｐ＞０．０５），说明不同厂家生产的鸡马立克氏病疫苗对Ｍｄ５超强毒株的攻击具有相　似的保护效果。因此在生产中使用国产马立克氏病疫苗或进口马立克氏病疫苗均能对我国当前流行的马立克氏　病有较好的保护效果。　关键词：马立克氏病；超强毒株；商品化疫苗；免疫效果；病理学观察　中图分类号：￥８５９．７９　７　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００５－９４４Ｘ（２０１５）１１－００８７－０４　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　Ｖａｃｃｉｎｅ　Ｅｆｉｃａｃｙ　ｆｉｎ　Ｃｈｉｃｋｅｎｓ　Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｖｅｒｙ　Ｖｉｒｕｌｅｎｔ　ＭＤＶ　Ｓｔｒａｉｎ　Ｍｄ５　Ｓｕｎ　Ｙｕｚｈａｎｇ　，Ｄａｉ　Ｙｏｎｇｌｉａｎ　，Ｗｕ　Ｇｕａｎｇｙｕ３，Ｙｉ　Ｆｕｄｅ　，Ｗａｎｇ　Ｙｏｎｇｌｉｎｇ　（１．Ｃｈｉｎａ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｅａｌｔｈ＆Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　２６６０３２：　２．Ｑｉｎｇｄａｏ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＡｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ＆Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　２６６１００：　３．ＨｏｒｑｉｎＲｉｇｈｔＷｉｎｇＭｉｄｄｌｅＢａｎｎｅｒＩｎｓｔｉｕｔｅ　ｏｆＡｎｉｍａｌＨｅａｌｔｔｈ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ，Ｘｉｎｇ’ｎＬｅａｇｕｅ，ＩｎａｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ　０２９４００）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｅｆｉｃａｃｙ　ｉｆｎ　ＡＡ＋ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖｅｒｙ　ｖｉｒｕｌｅｎｔ　ＭＤＶ　ｓｔｒａｉｎ　Ｍｄ５．１５０　ＡＡ＋ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｗｅｅ　ｒｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　５　ｇｒｏｕｐｓ：ｃｈａｌｌｅｎｇｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ＱＹＨ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｇｒｏｕｐ，Ｍｅｒｉａｌ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｇｒｏｕｐ，Ｒｉｎｇｐｕ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｕｎｖａｃｃｉｎａｔｅｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｗｅｒｅ　ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅａｃｈ　ｔｈｒｅｅ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ＭＤ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｔ　１　ｄａｙ　ｏｌｄ，ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｍｄ５　ｓｔｒａｉｎ　ａｔ　８　ｄａｙｓ　ｏｌｄ．Ｄｕｒｉｎｇ　６０　ｄａｙｓ　ａｆｔｅｒ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅ，ａｌｌ　ｄｅａｄ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ａｎｄ　ｄｉｓｓｅｃｔｅｄ　ｆｏｒ　ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｅ—ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ＭＤ　ｖａｃｃｉｎｅｓ（Ｐ＞０．０５），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ＭＤ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｗａｓ　ａｓ　ｅｆｉｃｉｅｎｔ　ａｓ　ｉｆｍｐｏｒｔｅｄ　ＭＤ　ｖａｃｃｉｎｅ．Ｎｅｖｅｒｔｈｅｌｅｓｓ，ｉｔ　ｉｓ　ｓｔｉｌｌ　ｎｅｃｅｓｓａｒｙ　ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ｎｏｖｅｌ　ｎｏｎ—ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｏｒ　ｇｅｎｅ—ｄｅｌｅｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｉｎ　ｈｅ　ｆｔｕｔｕｒｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍａｒｅｋ＇ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ；ｖｅｒｙ　ｖｉｒｕｌｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎ；ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｖａｃｃｉｎｅ；ｖａｃｃｉｎｅ　ｅｆｉｃａｃｙ；ｈｉｆｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ　马立克氏病（Ｍａｒｅｋ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＭＤ）是由　疱疹病毒科马立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉ—　腺、虹膜、肌肉和皮肤单独或多发的淋巴样细胞浸　润并形成大体肿瘤病变为特征［１－３］ｏ该病存在于世　界上所有养禽国家和地区，是一种严重危害集约化　ｒｕｓ，ＭＤｖ）引起鸡的一种高度接触传染性Ｔ淋巴　细胞增生性肿瘤疾病，以内脏器官、外周神经、性　基金项目：中央财政农业技术推广项目（ＣＡ２０１４０３０２５）；　山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金　（ＳＤＡＩＴ．１３．０ｌ１．１３）　家禽养殖业的传染病。虽然ＭＤ的疫苗接种是兽　医学成功控制家禽疫病的典型范例，但由于本病的　意外暴发以及随着ＭＤＶ毒力的不断增强可能导致　的免疫失败和免疫抑制所造成的严重经济损失，本　通讯作者：王永玲　病仍然是全世界家禽养殖业关注的焦点［１］。　囫　ＭＤＶ是一群细胞结合性的ａ．疱疹病毒，但　具有Ｙ一疱疹病毒的嗜淋巴特性。根据免疫琼脂　扩散试验、免疫荧光试验和型特异单克隆抗体可　将ＭＤＶ分离株分成Ｉ、ＩＩ和ＩＩＩ　３种血清型［３】。Ｉ型　１．３剖检和病理组织学检测　对试验期间死亡的鸡只逐只剖检，观察并记　录心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、腺胃和肌胃等　组织器官的大体病变。试验期结束后（６７日龄），　对所有实验组的鸡只分别取血并进行常规血相观　察。将所有试验组的鸡只全部剖杀后，取疑似病　变组织器官经甲醛溶液固定、常规法石蜡包埋制　ＭＤＶ包括强毒ＭＤＶ分离株及其人工或自然致弱　毒株；ＩＩ型为从鸡体分离的无致病性ＭＤＶ毒株；　ＩＩＩ型包括火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）及其变异株。根据　免疫鸡群攻毒保护试验，又可将Ｉ型ＭＤＶ分为四　种不同毒力的类型：温和型（ＩＩ１ＭＤＶ）、强毒型　（ｖＭＤＶ）、超强毒型（ｗＭＤＶ）和特超强毒型　（ｖｖ＋ＭＤＶ）。目前我国尚无ｖｖ＋ＭＤＶ的分离报道［４］。　作为一种可用疫苗防治的肿瘤性疫病，１日龄接种　疫苗是有效控制ＭＤ和减少经济损失的主要手段。　本研究通过对３种商品化ＭＤ疫苗进行的免疫效　力比较试验，旨在比较不同商品化ＭＤ疫苗的免　疫效果，为当前我国ＭＤ的防控提供有益的借鉴。　１材料与方法　１．１试验动物、疫苗和病毒株　１日龄ＡＡ＋肉鸡由诸城外贸有限责任公司提　供种蛋并孵化。鸡马立克氏病活疫苗（ＣⅥ９８８／　Ｒｉｓｐｅｎｓ株）分别由梅里亚动物保健有限公司和乾　元浩生物股份有限公司生产；鸡马立克氏病Ｉ、　ⅡＩ型二价活疫苗（ＣＶＩ９８８＋ＦＣ１２６株）由天津瑞普　生物技术股份有限公司生产；鸡马立克氏病超强　毒Ｍｄ５株由山东农业大学动物医学院提供，液氮　保存。　１．２试验分组与攻毒　将１５０只１日龄ＡＡ＋肉鸡随机分为５个组，　分别为攻毒对照组、乾元浩疫苗组、梅里亚疫苗组、　瑞普疫苗组和空白对照组，每组３０只，分别隔离　饲养。３种疫苗同时按厂家说明剂量接种免疫１日　龄　肉鸡，８日龄时以１　５００　ＰＦＵ／只的剂量分　别对试验组的ＡＡ＋肉鸡腹腔注射马立克氏病超强　毒Ｍｄ５株，空白对照组腹腔注射等量生理盐水。　所有ＡＡ＋肉鸡分别在隔离器中饲养至６７　ｄ，分别　于１　ｄ、７　ｄ、１５　ｄ和６７　ｄ称量体重并记录。攻毒后　每天观察所有试验组鸡的精神状态，记录其发病和　死亡情况。　囝　片、ＨＥ染色后光镜下观察各组织器官的病理组织　学变化。　２结果　２．１　试验组的临床症状　攻毒对照组的鸡只在攻毒后第２周开始出现厌　食、精神萎顿、羽毛蓬乱和体型消瘦，攻毒对照　组攻毒后第６７天的平均体重相比空白对照组体重　平均减少１０％－２０％，比免疫攻毒组平均减少７％～　１５％（数据未发表）。攻毒对照组的鸡只眼观可见　关节肿大，后期可观察到马立克氏病比较典型的劈　叉症状（图１Ａ）。攻毒对照组的鸡只最早于攻毒　后第２１天发生死亡，死亡高峰期集中出现在攻毒　后第３２－５０天，病死率为８６．６７％（２６／３０）。免疫　攻毒组的鸡只均有不同程度的出现关节肿大和体型　消瘦，在攻毒后第６周开始出现零星死亡的鸡只，　其中梅里亚疫苗组的病死率（６．６７％）略低于乾元　浩疫苗组（１３．３３％）和瑞普疫苗组（１０．００％），　差异不显著（Ｐ＞０．０５）。　图１攻毒对照组的临床症状和病理剖检　２．２病理解剖　攻毒对照组在攻毒后第３周开始出现死亡　病例，剖检未见明显的眼观肿瘤病变，可见肝、　肾、脾和法氏囊等不同程度的肿大，肺轻度淤血，　３讨论与分析　由于３种血清型的ＭＤＶ之间具有一定的交叉　保护，因此从上世纪７０年代以来，火鸡疱疹病毒　（ｈｅｒｐｅｓ　ｖｉｒｕｓ　ｏｆｔｕｒｋｅｙ，ＨＶＴ）、ＨＶＴ＋ＳＢ－１双　价疫苗和ＣＶＩ９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ株弱毒活疫苗等都曾先　后成为有效预防ＭＤ的疫苗。但广泛使用疫苗也　促进了ＭＤＶ的进化，从上世纪９０年代开始欧美　地区陆续出现ＣＶＩ９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ株弱毒活疫苗都不　能完全保护的超强毒株和特超强毒株ｌ５］，给世界养　禽业造成巨大损失。由于我国的养禽情况更为复杂，　如ＭＤＶ野毒株毒力的不断增强、幼仔鸡的早期感　染、ＭＤ疫苗的使用不当以及大环境生物安全措施　的缺位等，ＭＤ的流行每年给中国的养禽业造成的　损失数以百亿计。　免疫攻毒试验结果表明，超强ＭＤＶ病毒株的　感染可以造成严重的免疫器官衰竭和明显的免疫　抑制，通过反复发生溶细胞性感染引发淋巴器官　受损，产生转化感染并诱发肿瘤形成［６】。ＣＶＩ９８８／　Ｒｉｓｐｅｎｓ株疫苗仍是目前预防ＭＤ超强毒株感染效　果最好的疫苗之一，能够比其它ＭＤ疫苗提供更　好的免疫保护力，有效地预防大多数ＭＤＶ流行毒　株的侵袭。本研究中不同厂家生产的鸡马立克氏　病疫苗均能够对ＭＤ超强毒Ｍｄ５株的攻击起到相　近的保护效果。因此在生产中使用国产ＭＤ疫苗　或进口ＭＤ疫苗均能对我国当前流行的ＭＤ有较　好的保护效果。但也有研究指出，ＭＤＶ强毒株感　染和ＣＶＩ９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ株在鸡体内的复制是相互独　立的【７］，使用ＣＶＩ９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ株疫苗也会造成机　体免疫器官或非免疫器官出现不同程度的淋巴细胞　浸润，因此可能会对鸡的生长和免疫产生一定的影　响ｆ８】。在本研究中，３组免疫攻毒组均出现了与攻　毒对照组相似的病变，尽管剖检未发现肿瘤病变，　但疫苗的毒力效应不可忽视。因此有必要开发ＭＤ　新型弱毒疫苗或基因缺失苗，对于我国预防和控　制ＭＤ的发生和减少养禽业的损失具有重要意义。　同时应该意识到，疫苗的使用不能从根本上阻断　ＭＤＶ的感染和传播，必须采取培育新型遗传抗性　品种　和加强养禽场的生物安全防控［１ｏ１等措施来　控制ＭＤ的发生和流行。　参考文献：　［１】ＳａｉｆＹ　Ｍ．禽病学［Ｍ］．苏敬良，高福，索勋，译．１２Ｎ．．北　京：中国农业出版社，２０１２：５２２．５９９．　［２】白文彬，于康震．动物传染病诊断学［Ｍ］．北京：中国农业　出版社，２００２：２２８．２３３．　［３］韦平，秦爱建．重要动物病毒分子生物学【Ｍ］．北京：科学　出版社，２００８：１０７．１３２．　［４】崔治中．中国鸡群病毒性肿瘤病及防控研究［Ｍ】．北京：　中国农业出版社，２０１２．　［５］Ｈａｑ　Ｋ，Ｆｅａｒ　Ｔ，Ｉｂｒａｈｅｅｍ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ＣＶＩ９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ　ｏｎ　ｌｏａｄ　ａｎｄ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｖｅｒｙ　ｖｉｒｕｌｅｎｔ　Ｍａｒｅｋ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ　ｓｔｒａｉｎ　ｉｎ　ｆｅａｔｈｅｒｓ　ｏｆ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．Ａｖｉａｎ　Ｐａｔｈｏｌ，２０１２，４１（１）：６９．７５．　［６］贺君君，滕丽琼，韦平，等．－６，－３－克氏病病毒体内复制动力　学研究进展［Ｊ］．中国家禽，２０１１，３３（５）：４７—５１．　［７】ＤａｖｉｓｏｎＦ，ＮａｉｒＶＵｓｅ　ｏｆＭａｒｅｋ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅｖａｃｃｉｎｅｓ：ｃｏｕｌｄ　ｔｈｅｙ　ｂｅ　ｄｒｉｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖｉｒｕｓ　ｔｏ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ？［Ｊ］．Ｅｘｐｅ￣　Ｒｅｖ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２００５，４（１）：７７—８８．　［８］郑永胜，张艳萍，李志杰，等．鸡马立克氏病病毒疫苗株对　强毒株的复制抑制作用［Ｊ】．中国预防兽医学报，２０１４，３６（１）：　７．１Ｏ．　［９］金元昌，陈壮，李玉峰，等．抗性选育协同疫苗免疫对鸡羽　囊马立克病毒载量的影响［Ｊ］．畜牧兽医学报，２０１５，４６（５）：　８３６．８４０．　［１０】周蛟．我国当前禽病流行概况及防控对策［Ｊ］．兽医导刊，　２０１４，（１２）：３７—３８．　（责任编辑：胡藕祥）