土壤多酚氧化酶(S-PPO)活性检测试剂盒说明书 微量法

北京索莱宝科技有限公司土壤多酚氧化酶（S-PPO）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号:BC0115规格:100T/96S产品内容：试剂一：粉剂×1瓶，临用前加入12mL蒸馏水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂三：乙醚，4℃保存(自备)；标准液：液体10mL×1瓶，重铬酸钾溶液（5mmol/L），相当于0.2mg/mL紫色没食子素溶液。标准品稀释：用0.5mol/LHCL溶液将标准液稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0mg/mL。产品说明：S-PPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。S-PPO能够催化邻苯三酚产生紫色没食子素，后者在430nm有特征光吸收。试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质）、乙醚（不允许快递）、冰和蒸馏水。操作步骤：1、可见分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至430nm，蒸馏水调零。2、标准曲线的建立：取0.2mL稀释好的标准液于比色皿或96孔板中在430nm处测定吸光值A，根据吸光度（x）和浓度（y，mg/mL）做出标准曲线。3、样本测定表第1页，共2页北京索莱宝科技有限公司试剂名称风干土样（g）试剂一（μL）试剂二（μL）试剂三（μL）测定管0.0212050430振荡混匀，30℃恒温培养1h振荡数次，室温静置30min，蒸馏水调零，取200μL上层液于430nm处测定吸光值A。注意：乙醚易挥发，转移至酶标板时建议一次性不要测定太多样本。S-PPO活性计算：根据标准曲线，将样品吸光值A带入公式中（x），计算出样品浓度y（mg/mL）。单位的定义：每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。S-PPO（mg/d/g土样）＝y×V提取相÷W÷T=516×yT：反应时间，1h=1/24d；V提取相：提取相总体积，0.43mL；W：样品质量，0.02g。第2页，共2页