金针菇杂交育种中亲本菌株的选择模式

福建农林大学学报（自然科学版）　第３９卷第４期　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｕｊｉａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）　２０１０年７月　金针菇杂交育种中亲本菌株的选择模式　江玉姬　，赵书光　，谢宝贵　，邓优锦　，刘新锐　，王宏雨　，　（１．福建农林大学茵物研究中心，福建福州３５０００２；２．福建农林大学食品科学学院，　福建福州３５０００２；３．福建农林大学生命科学学院，福建福州３５０００：２）　摘要：对２３个菌株进行ＩＳＳＲ聚类分析，选择遗传距离较远的５个菌株，通过ＰＤＡ平板拮抗试验验证它们为不同的菌株；　测定了这５个菌株的脱氢酶活性、羧甲基纤维素酶活性、菌丝生长速度，并建立了它们与产量的关系．结果表明：上述指标　与产量有较高的线性正相关；用这些指标来预测菌株的产量和杂交优势，不需进行繁琐、周期较长的出菇试验；用这种模式　来选择金针菇杂交育种中的亲本，具有简便、快速等优点，可以缩短杂交育种的周期．　关键词：金针菇；杂交育种；亲本菌株；模式　中图分类号：Ｑ　９３９．９６　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７１－５４７０（２０１０）０４－０４０３－０６　Ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ　ｐａｒｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｏｒ　Ｆｌａｍｍｕ￣ｎａ　ｖｅｌｕ￣ｐｅｓ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ＪＩＡＮＧ　Ｙｕ－ｊｉ　’　，ＺＨＡＯ　Ｓｈｕ—ｇｕａｎｇ　・。，ＸＩＥ　Ｂａｏ—ｇｕｉ　，　，ＤＥＮＧ　Ｙｏｕ－ｊｉｎ　，　，ＬＩＵ　Ｘｉｎ—ｒｕｉ　＇　，ＷＡＮＧ　Ｈｏｎｇ—ｙｕ　’　（１．Ｍｙｃｏｌｏ￣ｃＭ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ；３．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　Ｆｕｊｉａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ　３５０００２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｉｖｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ　ｖｅｌｕｔｉ￣ｓ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｂｙ　ＩＳＳＲ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｒｏｍ　２３　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｍｏｒｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｅｘｉｓ－　ｔｅｄ　ａｍｏｎｇ　５　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｖｅｒｉｉｆｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｔｅｓｔ　ｏｎ　ＰＤＡ　ｆｌａｔ．Ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｙｉｅｌｄ，ＣＭＣａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｙｉｅｌｄ，ｍｙｃｅｌｉｌａ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｙｉｅｌｄ，ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅｓｅ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ａｎｄ　ｙｉｅｌｄ　ｗｅｒｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｌｉｎｅａｒ．Ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｆｏｒｅｃａｓｔｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅｓｅ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ　ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ　ｐａｒｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｏｒ　Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ　ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｗａｓ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｈａｎｄｙ　ａｎｄ　ｅｃｏｎｏｍｉｃ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ　ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ；ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ；ｐａｒｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎ；ｍｏｄｅｌ　金针菇是目前食用菌工厂化周年栽培的主要品种，而菇体颜色是金针菇重要的商品性状．国内外市场　上白色品种最受消费者青睐，售价也高于黄色品种．但白色品种的生长周期比黄色品种长，产量也较低．培　育高产优质的白色金针菇品种是当前的重要任务，其中杂交育种是当前食用菌育种中应用最广、效果最显　著的一种手段，而亲本的合理选择是杂交育种成败的一个关键环节¨　］．陆准　对香菇杂交育种中亲本的　选择进行研究，在金针菇杂交育种中，用聚类分析、ＲＡＰＤ技术选择亲本已有一些报道ｎ　］．但将聚类分　析、ＲＡＰＤ技术与生理生化指标相结合来选择杂交亲本，尚末见报道．本文将形态、生理生化特征和分子生　物学手段相结合研究金针菇杂交育种中亲本选择的模式，为金针菇杂交育种中亲本的选配提供依据．　１材料与方法　１．１供试菌株　２３株金针菇菌株：均为福建农林大学菌物研究中心收藏与保存（表１）．　１．２培养基　ＰＤＡ培养基：２００　ｇ马铃薯＋２０　ｇ葡萄糖＋２０　ｇ琼脂＋１０００　ｍＬ水，ｐＨ值自然．　收稿日期：２００９—０９—０９　修回日期：２０１０—０３—１２　基金项目：福建省自然科学基金资助项目（２００６Ｊ０５５）；福建省科技厅资助项目（２００７Ｎ０００３、２００８ＳＺ０００２）．　作者简介：江玉姬（１９６５一），女，教授．研究方向：微生物学．Ｅｍａｉｌ：ｊｙｊ１２０９＠１６３．ｃｏｒｎ．通讯作者谢宝贵（１９６２一），男，教授．研究方向：食用　菌．Ｅｍａｉｌ：ｍｒｃｆａｆｕ＠１６３．１３ｏｍ．　・４０４・　福建农林大学学报（自然科学版）　表１供试菌株　Ｔａｂｌｅ　１　Ｓｔｒａｉｎｓ　ｕｓｅｄ　ｉｌａ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　第３９卷　序号　１　２　３　４　５　６　７　菌株　号　ＦＯｔＸ）３　Ｆ０ｏ（）５　ＦＯＯｔＪ６　ＦＯ０ｔ）８　ＯＯｔ）Ｆ９　１；００１　０　Ｏ０１Ｆ１２　品种　９８　８８０１　１４７　８９０９　０８８　金１３　金２ｌ　子实体颜色　白　白　自　白　自　黄　自　序号　１３　１４　１５　１６　１７　１８　１９　菌株编号　Ｏ０１８　ＦＦ００１９　Ｏ０２０　ＦＦ００２７　Ｏ０３０　Ｆ１７００３１　Ｆ００３３　品种　金杰二号　Ｇｄｄｅｎ．ｆ．ｖ　川金二号　三明一号　杂１９　ＦＬ９８　ＦＬ９８７　子实体颜色　黄　黄　黄　黄　黄　自　自　８　９　ＦＯ０　ａ　Ｌ３　ＦＯＯｌ４　金７　自ｌ５　黄　白　２０　２１　１７００３４　ＯＯ３５　ＦＦ２３　金３　黄　自　１０　ＯＯｌ５　Ｆ自金　白　２２　Ｆ００３６　白２０８　自　Ｉ１　１２　ＦＯ０１６　Ｏ０１７　Ｆ金自一号　金白８９０１　黄　白　２３　Ｆ００３７　１３．　ｖ　黄　栽培料培养基：３７％棉籽壳＋３７％干杂木屑＋２４％麸皮＋１％糖＋ｌ％碳酸钙，料水比为１－１．３左右，　ｐＨ自然．　羧甲基纤维素钠培养基（ＣＭＣ－Ｎａ）：５　ｇ羧甲基纤维素钠＋０．５　ｇ　ＭｇＳＯ４＋２　ｇ　ＫＨ２ＰＯ４＋２　ｇ酵母粉＋　１５　ｇ琼脂＋１０００　ｍＬ蒸馏水．　１．３　２３个菌株的ＩＳＳＲ聚类分析　分析了福建农林大学菌物研究中心提供的２３株金针菇ＩＳＳＲ分子标记电泳图谱ｌ－５　；在ＩＳＳＲ电泳图上　寻找可用于品种鉴别的多态性条带，对ＩＳＳＲ扩增片段进行统计，有该多态性条带的记为“１”，无多态性条　带的记为“０”；将统计的“０—１”数据输入ＤＰＳｖ　６．５５数据统计分析软件中，根据Ｊａｃｃａｒｄ聚类距离采用类平　均法（ＵＰＧＭＡ）进行０—１聚类分析，生成遗传聚类图和相异系数表　Ｊ．计算Ｊａｃｃａｒｄ相异系数，其公式为：　Ｄ　＝１一Ｘ　／（Ｘ　＋置＋　）　式中，Ｄ　ｆ是菌株ｉ和Ｊ．的Ｊａｅｃａｒｄ相异系数，置表示Ｘ菌株特有的带数，　表示ｙ菌株特有的带数，　表示　、ｌ，菌株共有的带数．Ｄ　范围为０—１，Ｄ　越接近于０，表示两菌株间的相似性程度越高；当Ｄ　越接　近１时，表示两者的相似性程度越低．从聚类图中得到种问杂交和种内杂交所用菌株的亲缘关系　】．　１．４　５株菌株的拮抗试验　将菌株以“品”字型接种于ＰＤＡ平板培养基上，５个菌株间彼此相互配对，２个接种块之间相距２　ｃｍ　左右．用封口膜封口后，置于２５　ｃＣ智能人工气候培养柜中恒温培养．当各菌株的菌落前端彼此接近时，观　察５个供试菌株之间的拮抗反应，并记录结果．　１．５　５株菌株的生理生化特征　１．５．１　菌丝生长速度斜面菌种转接于ＰＤＡ斜面培养基上，置于２５℃智能人工气候培养柜中恒温培养　至菌丝长满试管斜面；然后，挑取斜面前端约Ｏ．５　ｃｍ　大小的菌种块转接到ＰＤＡ（２０　ｍＬ）平板培养基上，培　养皿直径为９　Ｃ１ＴＩ，用封口膜封口后置于２５℃智能人工气候培养柜中恒温培养；当菌落直径达到４—６　ｃｍ　时，以接种块为圆心，在半径３　ｃｍ的圆周上，使用口径为Ｏ．７　ｃｍ的打孑Ｌ器打孔制备接种块，以确保所有接　种块的菌龄、体积一致．　将制备好的不同菌株的接种块分别接种于ＰＤＡ平板培养基上，每个菌株５个重复，置于２５　ｑＣ智能人　工气候培养柜中恒温培养．当菌落直径达到２　ｃｍ时，在菌落边缘画线作为菌丝生长起始线（　），然后继续　培养．当生长最快的菌株即将长满ＰＤＡ平板时取出所有的培养皿，在菌落边沿再画一终止线（　：），用直尺　测量起始线与终止线之间的距离，将此距离除以培养天数（ｄ）即为菌丝平均生长速度．　菌丝平均生长速度＝（Ｌ：一Ｌ　）／ｄ　１．５．２脱氢酶活性按照１．５．１中的方法制备接种块，备用．将配制好的０．１％（体积分数）溴百里香酚蓝　溶液稀释２５倍后，分别取稀释液５　ｍＬ加到已写有标签的试管中，每支试管加人５个接种块，每个菌株３　个重复；振荡至菌块没人ＢＴＢ溶液中，塞上硅胶塞后，置于３５℃隔水式恒温培养箱恒温培养，１　ｈ后振荡　第４期　江玉姬等：金针菇杂交育种中亲本菌株的选择模式　・４０５・　试管，使接种块与ＢＴＢ溶液充分反应；２　ｈ时后，取出试管摇匀．将反应液注入７　ｍＬ离心管中，以不加接种　块的ＢＴＢ溶液为对照，用轻便色彩色差仪测定不同菌株的亮度值．　１．５．３羧甲基纤维素酶（ＣＭＣ）相对活性将不同菌株接种块分别接种于羧甲基纤维素钠平板培养基上，　每个菌株３个重复，２５℃恒温培养７—１０　ｄ．当菌丝生长最快的菌株即将长满平板时，用０．２５％（体积分　数）刚果红染色３０　ｍｉｎ；然后倒去染液，用１　ｍｏｌ・Ｌ　ＮａＣ１漂洗５　ｍｉｎ后倒去ＮａＣ１；再用１　ｍｏｌ・Ｌ　ＨＣ１　漂洗１５　ｍｉｎ，倒去ＨＣ１洗液后用直尺测量ＣＭＣ—Ｎａ培养基上透明圈的半径，并分别计算不同菌株的ＣＭＣ　相对活性　．　ＣＭＣ相对活性＝透明圈半径／培养天数　１．５．４　出菇试验按配方配制栽培料，采用规格为１７．５　ｃｍ　Ｘ４０　ｃｍ　Ｘ０．０５　ｃｍ的聚丙烯塑料袋装袋，装料　高度约１５　ｃｍ，中间预留直径２．５　ｃｍ、深１２　ｃｍ的接种穴，湿料约１０００　ｇ，上下松紧一致，料面平整，塞上棉　花塞，０．１４　ＭＰａ高压灭菌２．５　ｈ后，冷却备用．　采用“两点”接种法接种，每个菌株接６袋，置于可控温控湿的菌种培养室发菌．发菌期间室内温度为　２０—２２℃，空气相对湿度６０％左右，避光并适当通风．当菌丝吃料２—３　ｅｍ左右时，用记号笔沿菌丝前端　画一条初始线（　），５—８　ｄ后，沿菌丝前端画一条终止线（Ｌ２），并计算菌丝的平均生长速度（计算方法同　１．５．１）．菌丝发菌满袋后，继续后熟培养１周，并逐渐降温；然后，将菌袋移出菇房进行出菇管理．出菇采用　“再生法”，诱蕾阶段保持１２—１３℃，子实体生长阶段保持６—８℃，弱光，每天间歇通风２—３次，空气相对　∞馏∞　Ｍ　＂驺　∞器器裟　　门　柏　竹　弘弘裟　　湿度８５％一９０％¨　．出菇期间记录５个菌株的单袋产量．　１．６数据处理　试验数据采用ＤＰＳｖ　６．５５数据处理软件进行分析，各处理平均数间的多重比较采用邓肯氏新复极差测　验．　２结果与分析　２．１　ＩＳＳＲ聚类分析　使用ＤＰＳｖ　６．５５数据处理软件，采用类平均法　（ＵＰＧＭＡ）进行０—１聚类分析，得到２３个金针菇菌株　的ＩＳＳＲ遗传聚类图（图１）．从图Ｉ可以看出：２３个金　针菇供试菌株的相异系数为０—０．５５；ＦＯ００８与ＦＯ００９、　ＦＯ０１０与ＦＯ０１３、Ｆ００１９与Ｆ００３０之间的相异系数接近　０，因此两两之间可能是同物异名．在Ｄ＝０．４２相异系　数水平上，可将２３个供试菌株划分为５类，各类型的组　成见表２．　表２中的类别５和类别２（除Ｆ０００５、Ｆ００１２外）为　黄色金针菇品种；类别１、３、４为白色金针菇品种；黄色　品种与白色品种之间的遗传差异较大，有丰富的多态　性．除Ｆ００２７（类别５）外，黄色品种之间的遗传差异不　大；同样，除Ｆ０００６和Ｆ００３６外，白色品种之间的遗传　图１　ＩＳＳＲ聚类分析图　Ｆｉｇ．１　Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　２３　ｓｔａｉｎｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＳＳＲ　差异也不大．２３个菌株几乎可以分成黄色和白色菌株两大类，但没有完全分开．类别２中ＦＯ００５、ＦＯ０１２是　白色品种，可能是引物不够多的缘故，也可能是因为这２个菌株是杂交菌株，虽然它们的子实体颜色为白　色，但它们更多遗传了黄色品种的遗传物质，具体原因有待进一步研究．　根据ＩＳＳＲ聚类分析结果（图１），有代表性地选择５株交配型不同、遗传距离较远的菌株：黄色菌株为　三明一号（Ｆ００２７，主栽品种，交配型Ａ３Ａ４Ｂ３Ｂ４）、Ｇｄｄｅｎ．ｆ．ｖ（ＦＯ０１９，野生品种，交配型Ａ１Ａ２Ｂ１Ｂ２），白色　菌株金２１（ＦＯＯｌ２，交配型Ａ１Ａ１０Ｂ１　Ｂ２）、白１５（Ｆ００１４，交配型Ａ２ＡｘＢ２Ｂ３）和金３（Ｆ００３５，交配型　Ａ２Ａ８Ｂ２Ｂ３），共５个菌株．测定它们的生理生化指标，以研究这些生理生化指标与产量的关系．　．４０６．　福建农林大学学报（自然科学版）　第３９卷　２．２拮抗试验　５个菌株的拮抗试验结果见表３．　由表３可知，５个供试菌株之间均存在一定的　表３　５个菌株ＰＤＡ平板拮抗结果　’　Ｔａｂｌｅ　３　Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　Ｏｎ　ＰＤＡ　ｉａｔｆ　拮抗关系，表明５个供试菌株之间存在一定的遗传　差异性，属于不同的金针菇菌株．此结果与ＩＳＳＲ聚　类分析结果相符合．　２．３菌丝生长速度　菌丝生长速度测定结果见表４，通过差异显著　和Ｆ００２７三个菌株之间差异不显著，菌丝平均生长　。】“一性分析可知：在ＰＤＡ平板培养基上，Ｆ００１２、Ｆ００１９　表示菌株之间拮抗较强．　”表示菌株之间无拮抗；“＋”表示菌株之间有拮抗；“＋＋”　速度大于０．５３　ｃｍ・ｄ～；Ｆ００１４和Ｆ００３５两个菌株之间差异也不显著，菌丝平均生长速度小于Ｏ．４０　ｃｍ・　ｄ～；可以将它们分为两类，这二类之间菌丝生长速度存在极显著差异。　在栽培料培养基中，菌丝生长速度测定结果及差异显著性分析见表５．从表５可知，５个菌株的菌丝生　长速度与在ＰＤＡ平板培养基上的一致．其中，Ｆ００２７菌株的菌丝生长速度最快，为０．５３　ｃｍ－ｄ　；ＦＯ０１４菌　株的菌丝生长速度最慢，为Ｏ．２５　ｃｍ・ｄ～．Ｆ００１２、Ｆ００１９和Ｆ００２７归为一类；ＦＯ０１４和Ｆ００３５为一类，这二　类之间存在极显著差异．从表４、５可知：在ＰＤＡ平板培养基和栽培料中，５个菌株的菌丝生长速度较一致．　表４　５个菌株在ＰＤＡ平板上菌丝生长速度显著性分析　Ｔａｂｌｅ　４　Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　ｍｙｃｅｌｉｌ　ａｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ　ｏｎ　ＰＤＡ　ｐｌａｔｅ　表５　５个菌株在栽培料中菌丝生长速度显著性分析　Ｔａｂｌｅ　５　Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　ｍｙｃｅｌｉｌ　ａｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｃｕｌｉｖａｔｔｉｏｎ　ｍａｔｅｒｉｌｓａ　２．４脱氢酶活性　用色彩色差仪测定的脱氢酶活性以及差异显著　性分析见表６．５个菌株之间存在极显著差异，其中，　表６　５菌株脱氢酶活性差异显著性分析　Ｔａｂｌｅ　６　Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　三明一号（Ｆ００２７）的脱氢酶活性最大，Ｄ值为１９．３５；　白１５（Ｆ００１４）的脱氢酶活性最小，Ｄ值为６．４７．　２。５　ＣＭＣ相对活性　５个菌株的ＣＭＣ相对活性测定结果见表７．　从表７可以看出．，在ＣＭＣ　Ｎａ平板培养基上，５　个供试菌株之间的ＣＭＣ酶活性存在一定差异．　Ｄ值表示色彩色差仪测定时仪器自动显示的数值，Ｄ值越大表　Ｆ００２７与Ｆ００１２之间以及Ｆ００１２与Ｆ００１９之间差异　均不显著，Ｆ００２７与Ｉ￣３０１９、Ｆ００３５、Ｆ００１４之间差异示菌株的脱氢酶活性越大・　显著；Ｆ００１２、Ｆ００１９、Ｆ００２７三个菌株归为一类，Ｆ００１４与Ｆ００３５归为另一类，两类菌株之间存在极显著差　第４期　江玉姬等：金针菇杂交育种中亲本菌株的选择模式　・４０７・　异．ＣＭＣ相对活性最大的菌株为Ｆ００２７．　２．６出菇试验　出菇试验测定结果见表８．　表７　５菌株ＰＤＡ平板ＣＭＣ酶活性显著性分析　Ｔａｂｌｅ　７　Ｓｉｇｎｉｉｃａｎｃｅ　ａｎａｌｆｙｓｉｓ　ｏｆ　ＣＭＣ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　０ｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｎ　ＣＭＣ—Ｎａ　ｆｌａｔ　表８　５菌株在栽培料中单袋平均产量显著性分析　Ｔａｂｌｅ　８　Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｔ　ｏｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　ｓｉｎｇｌｅ—ｂａｇ　ａｖｅｒａｇｅ　ｙｉｅｌｄ　ｉｎ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｍａｔｅｒｉｌｓａ　从表８中可以看出，５个菌株的单袋平均产量之间存在一定差异．在５％显著水平上，Ｆ００２７与ＦＯ０１９、　Ｆ００１９与Ｆ００１２及Ｆ００１４与１７００３５之间差异不显著；Ｆ００２７与其它４株之间差异显著．在１％显著水平上，　Ｆ００２７、Ｆ００１９、ＦＯ０１２之间，以及ＦＯＯｌ４与Ｆ００３５之间差异不明显．　据５个菌株之间单袋平均产量的差异性可以将菌株分为两大类，即，ＦＯＯｌ２、Ｆ００１９、Ｆ００２７三个菌株归　为一类，Ｆ００１４与Ｆ００３５归为另一类，两类菌株之间存在极显著差异．其中，Ｆ００２７菌株的单袋平均产量最　高，为２０３．２　ｇ；ＦＯＯｌ４菌株的单袋平均产量最低，为９０．９　ｇ．　５个菌株的满袋时间等农艺性状见表９．　从表９可以看出，５个菌株栽培料的满袋天数、　表９　５菌株出菇农艺性状　Ｔａｂｌｅ　９　Ａｇｒｏｎｏｍｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ　ｄａｔａ　ｏｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　现蕾天数、采收天数等性状之间存在一定差异．菌丝　长满袋所需的天数，Ｆ００２７菌株最短，为２７　ｄ；而　Ｆ００３５菌株最长，为３５　ｄ．Ｆ００１９与Ｆ００２７菌株现蕾最　早，为２８　ｄ；而ＦＯ０１４菌株现蕾最迟，为３６　ｄ．ＦＯ０１９　与Ｆ００２７菌株５７　ｄ后即可以采收；而Ｆ００１４菌株最　迟，６８　ｄ后才可以采收．　２．７　５个菌株脱氢酶活性与产量的关系　对５个菌株的脱氢酶活性与单袋平均产量之间的根关性进行分析，结果见图２．从图２可以看出，５个　菌株的脱氢酶活性与单袋平均产量之间的相关系数Ｒ　＝：０．９０７７，表明二者之间存在较高的线性相关．脱　氢酶活性高的菌株，其鲜菇的单袋平均产量也较高．脱氢酶活性由高到低排列如下：Ｆ００２７＞ＦＯＯｌ２＞　ＦＯＯｌ９＞Ｆ００３５＞ＦＯ０１４．不同菌株的单袋平均产量由高到低排列如下：Ｆ００２７＞ＦＯＯｌ９＞ＦＯＯｌ２＞Ｆ００３５＞　ＦＯＯｌ４．上述两者高低排列顺序基本一致，说明可以用菌株脱氢酶活性来预测菌株产量．因此，脱氢酶活性　可以作为选择杂交亲本的一个指标．　２．８　ＣＭＣ活性与产量的关系　对５个菌株的羧甲基纤维素酶与单袋平均产量之间的ｔ相关性进行分析，结果见图３．　从图３可以看出，５个菌株的ＣＭＣ酶活性与单袋平均产量之问的相关系数Ｒ　：０．９５６８，表明二者之　间存在较高线性正相关，即ＣＭＣ酶活性高的菌株，其鲜菇的单袋平均产量也相应较高．ＣＭＣ酶活性由高　到低排列如下：Ｆ００２７＞ＦＯＯｌ２＞Ｆ００１９＞Ｆ００３５＞ＦＯ０１４，与７－－同菌株产量的高低排列顺序基本一致，因此，　ＣＭＣ酶活性的高低可以作为选择杂交亲本的一个指标．　２．９菌丝生长速度与产量的关系　５个菌株在ＰＤＡ平板上的菌丝生长速度与产量的关系见图４，　商丝生长速度与产量有较高的正相关，　说明菌丝生长速度可作为预测菌株产量的一个指标，因此，可以作　选择杂交亲本的一个指标．５个菌株　在栽培袋中菌丝生长速度与产量的关系见图５，菌丝生长速度与产量也有较高的正相关，２种培养基上菌　丝的生长速度与产量的相关系数十分接近．因此，可以ＰＤＡ平板上的菌丝生长速度作为选择杂交亲本的　・４０８・　福建农林大学学报（自然科学版）　第３９卷　枥２　２，　指　个　∞∞如∞∞０　∞＼．軎　斟　：　∞　＼　饪、　蕃　Ｏ　５　ｌ０　１５　２０　脱氢酶相对活性　ＣＭＣ－Ｎａ相对酶活性　图２　５个菌株脱氢酶相对活性与产量之间的关系　Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　２５０　∞２００　图３　５菌株ＣＭＣ相对酶活性与产量之间的关系　ｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｒｅｌＦａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＣＭＣ　ａｃｔｉｉｖｔｙ　ａｎｄ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　２５０　２００　１５０　ｌｏｏ　５Ｏ　Ｏ　蚓鲁ｌ５０　ｌｏｏ　５０　Ｏ　０　０．１　０．２　０．３　０．４　０．５　Ｏ．６　Ｏ　Ｏ．１　０．２　Ｏ－３　０．４　０．５　Ｏ．６　菌丝生长速度／（ｃｍ・ｄ　）　菌丝生长速度／（ｃｍ・ｄ　）　图４　平板上菌丝生长速度与产量的关系　Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｙｉｅｌｄ　ａｎｄ　ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ　Ｏｉｌ　ｐｌａｔｅ　图５栽培袋中菌丝生长速度与产量的关系　Ｆｉｇ．５　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｙｉｄｄ　ａｎｄ　ｍｙｅｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　３结论　在食用菌杂交育种中，通过同工酶分析¨川、配合力分析　和多个与产量和质量相关的经济性状的测　定来估算遗传距离大小，选择杂交亲本，获得了具有杂种优势的优良菌株．本文首先用菌株ＩＳＳＲ聚类分析　结果，选择遗传距离较远的５个菌株，通过ＰＤＡ平板拮抗试验验证它们为不同的菌株．测定了这５个菌株　的脱氢酶活性、ＣＭＣ活性、菌丝生长速度，并建立了它们与产量的关系．结果表明，这些指标与产量之间有　较高的线性正相关，可用这些指标来预测菌株的产量，不需经过繁琐、周期较长的出菇试验，为金针菇杂交　育种中亲本的选择建立了一个模式．用这种模式来选择金针菇杂交育种中的亲本，具有简便、快速的优点，　可以缩短杂交育种的周期．本研究选择黄色菌株三明一号（Ｆ００２７）、白色菌株金２ｌ（ＦＯ０１２）和金３（Ｆ００３５）　为金针菇“三交”育种的亲本材料．　参考文献　［１］詹才新，朱兰宝，杨新美．ＲＡＰＤ技术在金针菇杂交育种中的应用［Ｊ］．食用菌学报，１９９５，２（１）：７—１１．　［２］郭美英．金针菇杂交育种研究［Ｊ］．食用菌，１９９３（４）：４—６．　［３］胡国元．金针菇杂交育种研究进展［Ｊ］．湖北民族学院学报，１９９７，１５（６）：２７—２９．　［４］陆准．应用聚类分析选择香菇杂交亲本组合初步研究［Ｊ］．中国食用菌，１９９１，１０（５）：８—１１．　［５］王秀全．白＿色金针菇的分子标记辅助育种技术研究［Ｄ］．福州：福建农林大学，２００５：３２—４１．　［６］ＮＥＩ　Ｍ，ＬＩＵ　Ｗ　Ｈ．Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｅｒｍｓ　ｏｆ　ｒｅｓｔｉｒｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｉｌ　Ａｅａｄ　Ｓｃｉ，１９７９，７６（１０）：５２６９—５２７３．　［７］赵明文，陈明杰，王南，等．灵芝生产用种的亲缘关系研究［Ｊ］．南京农业大学学报，２００３，２６（３）：６０—６３，３７．　［８］胡国元，朱兰宝，周玉麟．聚类分析在金针菇杂交育种中的应用［Ｊ］．微生物学通报，１９９８，２５（３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