从银杏叶片中提取分离银杏内酯

银杏叶的主要化学成分

到目前为止，文献报道的银杏叶主要的化学成分包括黄酮类、萜内酯、聚戊烯醇和多糖类化合物。此外，还包含烷基酚酸类、有机酸、甾类、微量元素等。

1银杏内酯概况

银杏叶提取物制剂是目前世界上最畅销的植物药之一银杏萜内酯为银杏叶提取物中主要的药效成分, 为二萜内酯化合物, 包括银杏内酯A、B、C、J 和M 等, 它们是血小板活化因子( p la t e l e t ac t iv a t in g f a c t o r ,P A F ) 的强有力的拮抗物, 是目前所有在售的银杏叶提取物制剂中最主要的药效成分, 其分子结构式如图所示

在银杏叶提取物的药理作用研究报告的基础上, 人们发现银杏内酯

和白果内酯具有独特的药理作用.19 87 年P.B r a q u e t 等报道银杏内酯B 具有抗血小板活化因子P A F 活性作用以来, 银杏内酯才真正引起人们的注意, 成为研究的热点.国内外学者对银杏菇内酯的药理和生理作用进行了广泛而深人的研究.

银杏内酯包括银杏内酯A, B, C, J. M和白果内酯，它们都具有特殊立体化学结构。国外对这类成分做了大量化学、药理和临床研究，发现银杳内酯均为血小板活化因子强拮抗剂，其中银杏内酯B由于分子中醚氧与羰基氧之间的距离和PAF中的相一致，活性最强。血小板活化因子(Platelet-activating factor, PAF)是由血小板和多种炎症细胞产生分泌的一种内源性磷脂，它是迄今为止发现最强的血小板聚集诱导剂，它直接参与血栓形成，与许多疾病的发生、发展密切相关。此外，银杏内酯对单一缺血损伤和中枢神经系统有保护作用，具有抗过敏、抗休克、抗器官移植排斥反应等作用。因此，银杏内酯类是银杏叶中特殊生理活性的最重要成分，具有很高的药用价值和广阔的临床应用前景。银杏内酯的复杂化学结构决定了化学合成的困难性，因此天然提取工艺将是生产银杏内酯的主要发展方向。银杳内酯含量很低(干燥叶片仅为0.001%^'0.8%)，且结构独特，提取分离步骤繁琐，得率低。国外一般采用有机溶剂多级萃取与硅藻土、硅胶吸附一洗脱或活性炭吸附一洗脱与醋酸沉淀法相结合的提取方法。国内有研究者将甲醇浸提的初提物经氧化铝、硅胶柱、活性炭三柱分离与乙酸已酯萃取相结合的办法，最终得到90%的内酯产品，工艺应用了三种柱色谱法，加上萃取过程，非常复杂。另有研究者根据内酯的性质，用含

0.1 %NaH2P04的沸水(PH=8 )分别从银杏初提物和银杏叶中浸提内酯，所得水相再被调到pH=5，用氯仿萃取，很容易获得高浓度的内酯混合物，但很难获得较纯的单体成分。

银杏内酯的提取方法有水浸提法、有机溶剂提取法、液一液萃取法、吸附一洗脱法、超临界流体萃取法(SFE ) 等，以上方法各有优缺点，根据各自的生产条件及要达到的目的选择适合自己的提取工艺。 参考文献方法，以银杏叶提取物为起始原料，制备银杏内酯，采用聚酞胺柱分离加结晶的方法，可一步获得符合要求的银杏总内酯，相比以上文献报道的方法，工艺简便可行，更加适合工业化大生产。

2拟定提取分离工艺原理与基本操作

1材料与仪器

(1)材料:银杏叶，724树脂(上海树脂厂)，聚酞胺(100-130目)酸性氧化铝(层析柱用，80-100目))400℃下活化Sh后使用甲醇(色谱纯)，去离子水，标准样品:GA, GB, GC和BB0银杏叶提取物(GBE):黄色粉末，其他试剂均为分析纯。

(2)仪器:安捷伦公司HP1050液相色谱仪，视差检测仪。 2实验方法与结果 溶剂萃取法

（1）采用干燥绿色银杏叶500g;

（2）浸泡银杏叶时蒸馏水适量:按第1次6倍量、第2次5倍量、第3次5倍量、浸提时保持沸腾并不停搅拌;

(3)浸泡时间第1次2h、第2次、第3次各1 h;

(4) 95%乙醇热溶（78℃）水浸膏3次，每次用量按叶重1倍计; (5)石油醚脱脂6～8次； (6)（6）乙酸乙酯萃取7～8次； (7)水洗萃取液至pH=7;

(8)利用NaHCO3水溶液荡洗可将黄酮类化合物转化为盐类并转入水相。

共进行3次平行试验，得率分别为0.61 ‰，0.64‰.，0.62‰，产品为自色针状晶体经HPLC检测，产品总内酯含量平均为81.5% 。 3银杏内酯的测定方法

(1)色谱条件:色谱柱:SUPELC018柱(250mmX 4.6mm,5 a m)，流动相:四氢吠喃一甲醇一水(1:8:15)，流速:0.5mI/min,检测器:视差折光检测器，柱温34℃，检测器温度35℃用外标法定量，进样量5微升。 (2)对照溶液的制备:精密称取银杏内酯A,银杏内酯B,银杏内酯C和自果内酯对照品适量，分别加甲醇溶解，酿成2mg/ml的对照品储备溶液依次用30%甲醇稀释成含银杏内酯A,B,C和自果内酯10.25.50.100. 150 ug/ml的系列对照品溶液。

(3)供试品溶液的制备:准确称取银杏提取物4mg,置于2ml容量瓶，30%甲醇溶解后，加30%甲醇至刻度线，摇匀溶液过酸性氧化铝吸附柱，用0.45 u m的微孔滤膜过滤，作为供试液。 4结果

(1)精密度试验:取浓度为50 u g/ml的银杏对照品溶液，按色谱条件，重复进样10次，测得银杏内酯A, B, C和自果内酯的RSD分别

为1.1%,1.1%,1.3%,1.0%，表明本法精度良好。

(2)加样回收率试验:精密称取已知含量的银杏提取物2mg，共6份，3分加入四种银杏内酯对照品储备液(2mg/ml)40ul,3份加入对照品储备液80 u 1，按供试品溶液制备项操作，以法制备、进样，计算回收率，GA, GB, GC和BB的平均回收率分别为

97.2%(RSD=2.4%),99.3%(RSD=1.9%),97.4%(RS D=1.8 %)和97.7%(RSD=2.5%)表明本法有良好的回收率。

(3)稳定性试验:取银杏内酯供试品溶液0.1.2.4.6.8h分别进样，记录峰高，接过4种峰高的RSD分别为1.4%,1.4%,1.2%和1.5%。可一见样品溶液在8h内稳定。 5样品测定

取银杏内酯供试液50 u l注入液相色谱仪进行测定测得4mg银杏提取物中含GA的量为0.115mg,GC的量为0.047mg,BB的量为0.162mg，即银杏内酯含量为9.0 %。

3分析

(1)对比试验表明，溶剂萃取法制备设备简单，产率高，能耗低，投资少，卫生安全，且得率高，为提取银杏内酯的较佳方法采用的溶剂萃取一柱提法质量优，含量高，但产率低囚为这种方法的最终目的是银杏内酯和黄酮的混合物，所以银杏内酯的含量较低，如果用于银杏内酯提纯还要加入除黄酮的步骤。

(2)采用HPLC -RI法，优化了对银杏提取物的银杏内酯含量的

测定他方法，满意的直接测得四种银杏内酯的含量。实验中用示差折光检测器检测，四种内酯在一定浓度的范围内线性特性良好。本实验方法操作简便快速，准确度高，重现性好。

4参考文献

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