不同组织的表达特征李涛，李少斌，王继卿，刘秀，胡江，罗玉柱(甘肃农业大学动物科学技术学院/甘肃省草食动物生物技术重点实验室，甘肃兰州730070)［摘 要\"【目的】研究角蛋白关联蛋白(keatin-associated proteins,KAPs)编码基因的遗传变异对绒毛性状的 影响，以丰富绵羊功能基因组学并开发基因标记)【方法】采用PCR-SSCP和DNA测序技术，检测KAP20-1编码基
因(KRTAP20-1)在甘肃高山细毛羊(细毛羊)、青海半细毛羊(半细毛羊)和藏绵羊(粗毛羊)3个群体中的变异情况； 利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术，检测KRTAP20-1基因在甘肃高山细毛羊、小尾寒羊(粗毛羊)成年母羊和 羔羊不同组织中的表达情况)【结果】3个绵羊群体KRTAP20-1基因共检测到4个SNPs,其中3个为非同义突变
导致氨基酸的改变(P. Gly10Ser、P. Tyr29Phe和巳Ser61Gly),1个为同义突变)等位基因A在3个绵羊群体中均为 优势等位基因，其余3个等位基因在不同绵羊群体中分布差异较大)甘肃高山细毛羊KRTAP20-1基因的遗传杂合
度、有效等位基因数和多态信息含量均高于其他2个群体)KRTAP20-1基因只在绵羊皮肤中表达，在其他组织中均 无表达；在小尾寒羊和甘肃高山细毛羊2个群体中，羔羊皮肤组织中KRTAP20-1表达量均高于母羊，且在小尾寒羊 皮肤组织中的表达量高于同期甘肃高山细毛羊，即表现出明显的群体差异性和时空差异性)【结论】绵羊
KRTAP20-1基因在不同用途毛用绵羊中的等位基因分布差异及组织表达的种群特异性和时空特异性提示，该基因
对羊毛相关性状的形成和表型均有影响)［关键词\"绵羊;KRTAP20-1基因；基因表达；羊毛性状［中图分类号］S826.9+ 1
［文献标志码］A ［文章编号］1671-9387(2019)12-0028-07Characteristics of genetic variation and expression in different
tissues of ovine KRTAP20-1 gene (Ovis dries)LI Tao,LI Shaobin,WANG Jiqing,LIU Xiu,HU Jiang,LUO Yuzhu(College of Animal Science and Technology , Gansu Key Laboratory of Herbivorous Animal Biotechnology ,Gansu Agricultural University , Lanzhou, Gansu 730070 , China)Abstract: ［Objective! This study investigated the effects of genetic variation of keratin-associated pro
teins (KAPs) coding gene on wool and cashmere traits to enrich ovine functional genomics and develop ge
netic markers. *Method+Using Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism
(PCR-SSCP) and DNA sequencing technology KRTA\"20-1 gene variation and distribution in di ferent
groupsofGansu Alpine Merino (fine wool sheep) Qinghai Semi-fine wool sheep (semi-fine woolsheep)
andTibetansheep (coarsewool) weredetected.Thequantitativereal-timePCR (qRT-PCR) wasusedto detecttheexpressionanddistributionof KRTA\"20-1 gene in di ferent tissues of Gansu Alpine Merino
(finewoolsheep ) andsmal-tailed Hansheep (coarse wool). *Result+Foursinglenucleotidepolymor-
phisms (SNPs) were detected in KRTAP20-1 gene of sheep , and three of them were non-synonymous mu-［收稿日期& 2018-11-09［基金项目&甘肃省基础研究创新群体计划项目(17JR5RA137J8JR3RA190)甘肃省科技计划项目(18YF1WA082)［作者简介&李 涛(1992 -)，男，甘肃天水人，在读硕士，主要从事草食动物遗传育种研究。E-mail:812974620@qq. com%通信作者&罗玉柱(1962 -)，男，甘肃景泰人，教授，博士生导师，主要从事现代生物技术应用研究。E-mail:luoyz@gSau. edu. cn
第12期李 涛，等：绵羊KRTAP20-1基因变异及其在不同组织的表达特征29tations causing amino acid changes (P. Gly10Ser( P. Tyr29Phe and P. Ser61Gly) and one was synonymous mutation tailed Han sheep was higher than Gansu Alpine Merino at same age. [Conclusion! The KRTAP20-1 gene showeddiferencesinaleledistributionandbreedspecificityandtime-spacespecificityontissueexpres- sion suggesting that this gene may have influence on formation and phenotype of wool related traits.Key words： sheep ；KRTAP20~1 gene ； gene expression； wool traits25 000年以前，瑞士湖附近的部落开始驯养绵 究发现,KRTAP6-3基因和羊毛直径具有相关性； 羊，收集羊毛和使用羊毛制品%1〕。国际毛纺组织统 计结果表明，澳大利亚和中国是世界上养羊数量和 绵羊羊毛产量最多的国家绵羊羊毛拥有巨大的 孙福亮等%15&研究发现，新吉细毛羊KRTAP13-1基 因与羊毛产量和羊毛拉伸长度有显著相关性，且羊 毛性状的遗传力为0. 3\"0• 6%16&。因此，以羊毛数量 市场需求和广阔的发展前景，其产品在地板、服饰、 和质量性状的调控基因为基因标记来改善羊毛的生 室内装潢、汽车和航空工业等领域广泛应用％4,因 此对羊毛性状的改良和提高意义重大)产具有重要意义。迄今为止，在羊HGT-KAPS家 族中已鉴另出 KRTAP6, KRTAP7, KRTAP8 和 角蛋白关联蛋白(KAPs)是羊毛和羊绒的主要 结构蛋白，对羊毛物理性质起着决定性作用 KAPs蛋白最显著的特征是富含甘氨酸(Gly)、酪氨 KRTAP22 4 个家族成员%7'17］。人 HGT-KAPS 家 族中的KRTAP20基因已被鉴定，定位于第21号 染色体上%18 ,由 KRTAP20-1 和 KRTAP20-2 组 成，且KRTAP20基因在头发纤维的基质层和皮质 层中表达%19&。绵羊KRTAP20-2基因的相关研究 已有报道%10& ,但绵羊KRTAP20-1基因的研究尚未 酸(Tyr)和半胱氨酸(Cys)6。目前，根据氨基酸含 量和种类差异，将KAPs蛋白分为高硫角蛋白关联 蛋白(high sulphur, HS KAP)、超高硫角蛋白关联 蛋白(ultra high sulphur, UHS KAP)和高甘氨酸/ 见报道。因此,本试验以绵羊KRTAP20-1基因为 候选基因，采用PCR-SSCP结合DNA测序技术和 实时荧光定量PCR技术，分析该基因在甘肃高山细 毛羊、青海半细毛羊和藏绵羊群体中的变异及其在 小尾寒羊及甘肃高山细毛羊羔羊和成年母羊不同组 酪氨酸角蛋白关联蛋白(high glycine/tyrosine， HGT KAP)%7］。KAP20-1属于高甘氨酸/络氨酸类 KAPs%& ,KAPs通过广泛的二硫键交联形成基质， 嵌入到角蛋白纤维丝的半胱氨酸残基中，从而形成 羊毛纤维的主体结构并决定羊毛特性［9］，因此 KAPs在确定绵羊羊毛纤维物理机械性能中起重要 织中的表达特征，以期为绵羊毛用性状的基因标记 及改良提供参考。作用%10&。KAPs编码基因(KRTAPs)为小片段基 因，大小为600〜1 500 bp,且不含内含子%11。1材料与方法1. 1试验材料研究表明KRTAPs基因与羊毛性状存在相关 性%12。艾买提•买买提%13通过对KRTAP9-2基 采集478只绵羊血样，每只绵羊颈静脉采血10 mL,柠檬酸葡萄糖溶液抗凝,-70 f冻存，用于基 因位点不同基因型与剪毛量的相关性分析，推测 KRTAP9-2基因对剪毛量有显著影响；Li等%4研 因组DNA提取。采样信息见表1。表1绵羊样品信息Table1 Sheepinformation数量/只Number190181品种Breed甘肃高山细毛羊Gansu Alpine Merino藏绵羊 Tibetan sheep采样地Location天祝县松山镇Song4hanCounty，Tianzhu甘南州玛曲县 Maqu County,Gannan羊毛类型Wool type细毛Finewool粗毛 Coar4ewool半细毛Semi-finewool青海半细毛羊QinghaiSemi-finewool4heep青海省河卡种羊场Hekabreeding4heepfarm，Qinghai107以甘肃高山细毛羊和小尾寒羊分别为细毛羊和 粗毛羊代表，在天祝县松山镇分别采集2个品种羔30西北农林科技大学学报（自然科学版）第47卷羊和成年母羊的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最 长肌和皮肤组织样品各3份，用于研究不同群体、不 同组织KRTAP20-1基因的表达特征。1.2引物设计与合成GenBank中BLAST软件在绵羊基因组中比对发现 了一个高度同源区，用Primer 5. 0设计引物，用 BLAST在线检测其特异性，由六合华大基因公司（北京）合成多态性筛选引物P1、荧光定量PCR引 参照GenBank公布的人类KRTAP20-1基因 （GenBank登录号:NC_000021. 9）编码区序列，利用 物P2以及内参基因—actin （GenBank登录号：No. NM001009784）引物。具体引物信息见表2。表2 绵羊KRTAP20-1基因引物信息Table2 Primersof KRTAP20-1geneinsheep引物名称PrimernameP1-引物序列（5'#3）-Primer sequence! #3 ）F: TCATATTCTGCAAGCAAAGGCR: GCTGATGGGTCTCAGTCACF： ACTACAGCAACTACTACGGTGR:AGAAGCTAGAGGACCAGTATCT F： AGCCTTCCTTCCTGGGCATGGAR: GGACAGCACCGTGTTGGCGTAGA扩增长度/bp Productlength 294退火温度/°CAnnealingtemperature601.3 试验方法1.31 PCR-SSCP检测 （1）血液基因组DNA提 1.3 2 组织表达检测 （1）总RNA提取。按照TRIzol 试剂使用说明书（Invitrogen, Carlsbad, CA, 取。采用试剂盒（天根生化科技有限公司）提取478 只绵羊血液基因组DNA, -20 C保存。（2） 常规PCR反应。PCR反应体系：上、下游 USA）从不同年龄甘肃高山细毛羊和小尾寒羊不同组织样品中提取总RNA。结合凝胶电泳和分光光 度法检测浓度和纯度,-80 C保存。（2） qRT-PCR 反应。使用 PrimeScriptTM RT 引物（0. 25 %mol/L）各 0. 4 %L, Taq 预混酶（5 U/%L） 11 %L, DNA 模板（50 ng/%L） 0. 8 %L,加 ddH2O 至 20 %L。PCR扩增程序：9700型PCR仪（ABI,美国）中 94 C预变性 5 min；94 C变性 30 s,60 C退火 30 s, 72 C延伸30 s,共35个循环；72 C终延伸10 min, PCR产物保存于4C。用1.5%琼脂糖凝胶电泳检 试剂盒和gDNA Eraser （TaKaRa）按照使用说明书 步骤将总RNA反转录为cDNA。扩增体系：cDNA 100 ng,每 种引物 0. 25 %mol/L, AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix（Vazyme,南京，中国）10. 0 %L,ROX Reference Dye 2 0.4 %L，加 ddH2O 至20 %L体系。热曲线先在95 C 5 min进行1次 循环，再在95 C 10 s、60 C 30 s和72 C 30 s条件 测PCR扩增产物的完整性和浓度。（3） SSCP检测。将2 %L PCR产物混合到8 %L 下进行40次循环。结果用 S 法％3&分析相对表 达量。变性缓冲液（0. 025%漠酚蓝、98%去离子甲酰胺、10 mmol/L EDTA（pH = 8. 0）和 0. 025% 二甲苯氰） 中，95 C热变性10 min,置于低温环境中迅速点样 2结果与分析2. 1绵羊KRTAP20-1基因变异分析至1%甘油+ 10%非变性聚丙烯酰胺凝胶胶孔中, 220 V、20 C条件下在0. 5XTBE缓冲液中垂直电 将PCR扩增产物置于1. 5%琼脂糖凝胶进行 电泳检测。结果显示PCR扩增产物单一，长度与目 泳工作18 ho再根据Byun等％1&报道的银染法染色 后判定SSCP带型，并干燥保存。（4） 等位基因序列测定。若SSCP条带为纯合 的片段大小一致（图1）。1 2 3 4 5 6 7 M600 bp400 bp300 bp200 bp100 bp子,直接对PCR扩增产物进行测序；若SSCP条带 为杂合子，杂合子序列需进行切胶测序％2&。每种等 位基因均选用 2 个不同的样品进行测序。 序列测定 由上海生工生物有限公司完成。（5） 数据统计分析。将统计的基因型数据利用 M. DNA Marker； 1 一 7. PCR 样品M. DNA Marker. 1 — 7. PCR samplePopgen 32. 0软件计算等位基因频率、遗传纯合度 图1 绵羊KRTAP20-1基因的PCR扩增结果Fig. 1 PCR amplification of KRTAP20-1 gene in sheep （H。）、遗传杂合度（HE和有效等位基因数（Nq）,再 利用等位基因频率用PIC软件计算群体多态信息 通过SSCP分析发现KRTAP20-1基因在3个 含量（PIC）。绵羊群体中共检测到A&.C.D 4个等位基因，4种第12期李 涛，等：绵羊KRTAP20-1基因变异及其在不同组织的表达特征31基因型分别为AA、AB、AC和AD（图2）。图2绵羊KRTAP20-1基因的PCR-SSCP检测结果PCR-SSCPofovine KRTAP20-1geneFig.2序列比对发现3个绵羊群体KRTAP20-1基 c. 181A/G为非同义突变，分别导致甘氨酸转变为丝 因存在4个SNPs位点，均位于编码区，且4个 SNPs位点均为转换位点，其中G/A转换最多，共有 氨酸（P. Glyl0Ser）,酪氨酸转变为苯丙氨酸 （P. Tyr29Phe）和丝氨酸转变为甘氨酸（P. Ser61Gly）； 3 处（c. 28G/A、c. 153G/A 和 c. 181A/G）, A/T 转 C.153G/A为同义突变（表3）o换有 1 处（c. 86A/T）。c. 28G/A、c. 86A/T 和 表3 SNPsA绵羊KRTAP20-1基因的SNPsTable3 SNPsof KRTAP20-1geneinsheep等位基因AlleleBCD氨基酸变化Aminoacidchangec. 28G/Ac86A/Tc. 153G/AGGAAGGP Gly10SerP Tyr29Phe-AGAAATGGc181A/GAAP Ser61Gly注：“一”代表氨基酸未发生变化。Note：\" — ” stands for no amino acid change.由表4可以看出，等位基因A在3个绵羊群体 中均为优势等位基因，其余3个等位基因在不同绵 羊群体中分布差异较大。甘肃高山细毛羊基因型 AC和AD频率最低，青海半细毛羊和藏绵羊中基 因型AB和AC频率最低。在3个群体中，甘肃咼 山细毛羊KRTAP20-1基因的遗传杂合度（Hq）、有 效等位基因数（Nq）和多态信息含量（PIC）均最大，3 个群体的PIC值均小于0.25,呈低度多态。表4 3个绵羊品种KRTAP20-1基因的遗传多态性分析Table 4 Genetic polymorphism of KRTAP20-1 gene in three sheep breeds品种Breed等位基因频率/%Alelicfrequency群体数量Population number基因型频率/%Genotypic frequency遗传多态性GeneticpolymorphismAA78.42AB14 743. 74AC3. 16AD3 68A89.2190. 65B7.37C1.583.27D1.844.21Ns1 251 211 20Ho0 780 810 82He0 220 190 17PIC0 190 170 16#值■ # value0 84甘肃高山细毛羊 Gansu Alpine Merino 青海半细毛羊Qinghai Semi- fine-wool sheep藏绵羊 Tibetan sheep19010781. 3183.426.541. 668 411.872.720. 980. 941815.5211.0591.030.825.432.2 KRTAP20-1基因在绵羊不同组织的相对 表达 利用qRT-PCR对甘肃高山细毛羊和小尾寒羊 的KRTAP20-1基因在心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最长肌和皮肤组织中的表达情况进行定量分析。结果（图3）表明KRTAP20-1只在2种绵羊32西北农林科技大学学报(自然科学版)第47卷的皮肤组织中表达，且在不同品种和年龄段的表达 量存在差异，其相对表达量见图4)300 bp200 bpKRTAP20-1B -actin200 bp100 bpM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1213 1415 1617 18 19 20 21 22 2324 25 26 27 28 M1,5,9,13,17,21,25分别为小尾寒羊羔羊的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最长肌和皮肤组织； 2,6,10. 14,18,22,26分别为小尾寒羊母羊的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最长肌和皮肤组织； 3,7,11,15,19,23,27分别为甘肃高山细毛羊羔羊的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最长肌和皮肤组织； 4,8,12,16,20,24,28分别为甘肃高山细毛羊母羊的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最长肌和皮肤组织 1,5,9,13,17,21,25： Small-tailed Han sheep lamb heart, liver, kidney, spleen, lung, longissimus dorsi,and cutis ； 2,6,10. 14,18,22,26：Small-tailed Han sheep ewe heart,liver,kidney,spleen,lung,longissimus dorsi,and cutis； 3,7,11,15,19,23,27：Gansu Alpine Merino lamb heart,liver,kidney,spleen,lung,longissimus dorsi,and cutis； 4,8,12,16,20,24,28： Gansu Alpine Merino ewe heart, liver, kidney, spleen, lung, longissimus dorsi,and cutis 图3 KRTAP20-1基因在绵羊不同组织中表达量的qRT-PCR结果Fig 3 qRT-PCRelectrophoresispaternof KRTAP20-1geneindiferenttissuesinsheepuuum * I—3讨论本研究结果表明，绵羊KRTAP20-1基因编码 O&KZMMjo u 故<衩晏0 序列中检测到4个SNPs,非同义突变中存在甘氨酸 转变为丝氨酸(P・Gly10Ser)、络氨酸转变为苯丙氨 酬 .2「0ssu小d」乂xu已 咫 酸(P. Tyr29Phe )和丝氨酸转变为甘氨酸 (P. Ser61Gly),其中2个SNPs导致甘氨酸和丝氨 酸含量的变化，这可能会改变蛋白质结构进而引起 41.小尾寒羊成年母羊；2.小尾寒羊羔羊；12 1. Small-tailed Han sheep ewe；2. Small-tailed Han sheep lamb ；3 Gansu Alpine Merino ewe；4. Gansu Alpine Merino lamb Fig. 4 Relative expression of KRTAP20-1 gene in skin tissue of Gansu Alpine Merino and small-tailed Han sheep 羊皮肤中的相对表达量高于甘肃高山细毛羊，在2 个群体羔羊皮肤中的相对表达量均高于其成年母 羊，且小尾寒羊羔羊中的相对表达量是其成年母羊 的1.35倍，甘肃高山细毛羊羔羊是其成年母羊的 1.65倍。KRTAP20-1基因在相同年龄不同群体中 的 表 达量 也 存 在 差 异 ,在 小 尾 寒 羊 羔 羊 中 的 相 对表 达量是甘肃高山细毛羊羔羊的2. 16倍，而在成年母 羊群体中是2. 63倍。UAQEIUH 3 表型性状的改变。甘氨酸可能影响蛋白质的二级结 3甘肃高山细毛羊成年母羊；4.甘肃高山细毛羊羔羊构，主要是破坏多肽链中&螺旋的结构，甘氨酸也被 称为“螺旋破坏剂”「24&。因此，甘氨酸的存在导致 HGT-KAPs结构更加灵活，从而更好地形成一个紧 图4 KRTAP20-1基因在甘肃高山细毛羊和 小尾寒羊皮肤组织中的相对表达量凑的蛋白质结构。丝氨酸残基会被磷酸化，这也会 影响蛋白质纤维的结构和相互作用％5&)本研究发现，绵羊KRTAP20-1基因在甘肃高 山细毛羊、青海半细毛羊和藏绵羊3个不同毛用绵 羊群体中等位基因分布不同。Li等％6&报道绵羊 由图4可以看出，KRTAP20-1基因在小尾寒 KRTAP26-1基因BC和D等位基因频率在美利 奴羊杂种羊和新西兰罗姆尼羊2个不同毛用群体中 存在差异，且基因分布特征和该基因影响的性状与 2个群体绵羊的羊毛表型性状特征相吻合。等位基 因在不同类型毛用绵羊中的分布差异表明该基因在 不同群体中受到的选择压不同，提示该基因与毛用 性状的选育相关。本研究荧 光 定 量 结 果 显 示 (KRTAP20-1 基 因 第12期李 涛，等：绵羊KRTAP20-1基因变异及其在不同组织的表达特征33只在甘肃高山细毛羊和小尾寒羊皮肤组织中表达, (KAP) gene that is associated wth variation in Cashmere goat 而在其他组织中均无表达，这与Gong等⑴得出的 fleeceweight %J& SmalRuminantResearch 2018 8 19%9& MatsunagaR(AbeR IshiD(etal Bidirectionalbindingprop- KRTAPs 基因具有组织特异性表达特征的结论一 致。KRTAP20-1基因在小尾寒羊皮肤中的表达量 ertyofhighglycine-tyrosinekeratin-associatedproteincontrib- utestothemechanicalstrengthandshapeofhair %J&Journal 高于甘肃高山细毛羊，且2个绵羊群体羔羊皮肤中 ofStructuralBiology 2013 183(3)：484-494%10& Bai L(Gong H(Zhou H etal Anucleotidesubstitutioninthe KRTAP20-1表达量均高于母羊，进一步证实该家 族基因的表达具有时空性研究表明KRTAP 基因在毛囊分化阶段的角质化细胞中起作用，对羊 ovineKAP20-2geneleadstoaprematurestopcodonthataf- fectswoolfibrecurvature %J& AnimalGenetics2018 49 4)： 毛形成具有至关重要的影响％7。考虑到甘肃高山 细毛羊和小尾寒羊分别为细毛羊和粗毛羊， KRTAP20-1的表达量不同，提示该基因在羊毛发 育中的重要作用。4结论KRTAP20-1基因在不同绵羊群体中的分布存 在差异，同时该基因的相对表达量在不同类型毛用 羊品种间存在差异，且表现出时空特异性。说明 KRTAP20-1基因对羊毛相关性状的形成和表型均 有影响。[参考文献]%1&佟 旳•纺织英语:M&.北京：中国纺织出版社，2014.Tong Y. Textile English [M&. Beijing： Chinese Textile 6 Ap- parelPress，2014：2：李少斌.世界羊毛业现状和发展趋势:J&.养殖与饲料，2018 !11)：5-8.LiSB Currentsituationanddevelopmenttrendofwoolindus- try in the world [J&. Animals Breeding and Feed，018(11) : 5- 8：3：张 莹，肖海峰.我国羊毛羊绒加工业发展现状及趋势分析 :J&.农业经济与管理，2014(2)：89-96.Zhang Y，Xiao H F. Analysis on development condition and trendofwoolandcashmereprocessinChina %J& Management ofAgriculturalEconomy 2014(2)：89-96：4：李少斌.绵羊角蛋白关联蛋白家族基因新成员鉴定及其与羊毛 性状的相关性分析:D&.兰州：甘肃农业大学2017.LiSB Identification of new ovine KRTAP family genes and theirefecton wooltraits %D& Lanzhou： Gansu Agricultural University 2017%5& Zhou H(Gong H(Yan W(etalIdentificationandsequencea- nalysis of the keratin-associated protein 24-1 (KAP24-1) gene homologueinsheep %J& Gene2012 511(1)：62-65%6& RogersM A(LangbeinL(Praetzel-WunderS etal Humanhair keratin-associated proteins (KAPs) [J&. International Review ofCytology 2006 251(3)：209-263%7& Gong H(Zhou H(ForrestR H(etal Woolkeratin-associated proteingenesinsheep-areview %J& Genes2016 7(6)：24%8& WangJ(CheL(HickfordJG etal Akeratin-associatedprotein 357%11&朱建勋，王继卿，胡 江，等.五个绵羊群体KAP11-1基因核苷酸序列变异分析:J&.华北农学报，2016 31(5)101-107. ZhuJX(WangJQ(HuJetal Nucleotidesequencevariations of KAP11-1genein5 Chinesesheeppopulations %J& Acta AgriculturaeBoreali-Sinica2016 31(5) 101-107%12& PurvisI W(FranklinIR Majorgenesand QTLinfluencing woolproductionandquality：areview %J& GeneticsSelection Evolution 2005 37(1)：97-107：13：艾买提•买买提.5个KAP基因在中国美利奴羊(新疆型)群 体中的多态性及其与毛性状关联性分析:D&.乌鲁木齐：新疆 农业大学 2013AiM T • M M T. Genetic polymorphism of five KAP gene andtheirassociationswithwoolqualitytraitsinChinesemeri- nosheep (Xinjiangtype) group %D&Urumqi：Xinjiang Agri- culturalUniversity 2013%14& Li S, Zhou H, Gong H,et al Variation in the ovine KAP6-3 gene (KRTAP6-3)isassociatedwithvariationin meanfibre diameter-associatedwooltraits %J& Genes2017 8(8)：204%15&孙福亮，曹 阳，鲁 承，等.新吉细毛羊KAP13-1基因多态 性及其对部分经济性状的影响:J&.中国兽医学报，2014,34 (12)：2022-2026Sun F L,Cao Y,Lu C,et al. Polymorphism of KAP13. 1 gene anditsefecton partialeconomictraitsin Xinjifine wool sheep %J& ChineseJournalof Veterinary Science(2014(34 (12)：2022-2026%16& WangJ(CheL(HickfordJ G H(etal Identificationofthe caprine keratin-associated protein 202 (KAP20-2) gene and itsefectoncashmeretraits %J& Genes2017 8(11)：328%17& LiS(Zhou H(Gong H(etalIdentificationoftheovinekera- tin-associated protein 22-1 (KAP22-1) gene and ts effect on wooltraits %J& Genes2017 8(1)：27%18& Rogers M A(LangbeinL(WinterH etal Characterizationof afirstdomainofhumanhighglycine-tyrosineandhighsulfur keratin-associated protein ( KAP) genes on chromosome 21q22. 1 [J&. Biol Chem,2002,277(50) #8993-49002.%19& ShimomuraY，Ito M Humanhairkeratin-associatedproteins %J& JournalofInvestigative Dermatology Symposium Pro- ceedings2005 10(3)：230-233[20] Kanai N,Fujii T,Sato K,et al Rapid and simple method for preparation ofgenomic DNA from easily obtainablecloted blood [J&. Journal of Clinical Pathology, 1994,47(11)： 1043- 104434西北农林科技大学学报（自然科学版）第47卷[21] Byun S O,Fang Q,Zhou H,et al An effective method for sil遗传特征研究％]•基因组学与应用生物学,018,7(2):710- 717.ver-staining DNA in large numbers of polyacrylamide gelsAnalytical Biochemistry,2009,385! 1) : 174-175.CheL J(Wang J Q(Li T(et al.Identification ofcaprine KRTAP26-1geneanditsgenescharacteristicsstudy [J].Ge- [22] Gong H, Zhou H, Hickford J G. Diversity of the glycine/tyro- sin,e-rich keratin-associated protein 6 gene (KAP6) family in nomicsand AppliedBiology 2018 37(2):710-717.[26] LiS(Zhou H(Gong H(etal.Identificationoftheovinekera- sheep %]. Molecular Biology Reports,201138(1) ：31.[23] Livak K J,Schmittgen,T D. Analysis of relative gene expres tin-associatedprotein26-1geneanditsassociationwithvaria- sion data using real-time quantitative PCR and the 2_aaCt method [J].Methods,2001,25 4)：402-408.[24] tionin wooltraits [J].Genes2017 8(9):225.%7]李正娟，李爱华，张 蕊，等.滩羊KAP1. 1基因在胚胎及二 Monne M,NilssonI,Elofsson A,etal.Turnsintransmembrane 毛期毛囊中的表达分析％]农业科学研究,2013,34(2) = 21- 25 (上接第18页)proteinincows [J] (Saccharomycescerevisiae) cultureon NDFd9gest9bltyand rumen ferfermentat9on of forage sorghum hay 9n Nub9an goat's kids [J]. Journal of Dairy Science, 20 07,3(3)： 13 3- 137<：21]张永根，李春雷，王艳菲，等.奶牛常用饲料干物质和蛋白质瘤 ParyadA(RashidiM pomaceinsheep [J] 2013 44(9) 1-6 因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容