气相色谱测定白酒中乙酸乙酯含量的方法

检测分析　ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００５－６５２１．２０１３．１６．０２６　霞品研究与并发　Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｎｄ　Ｄｅｖｅｉｏｏｍｅｎｔ　２０１３年８月　第３４卷第１６期　９１　气相色谱测定白酒中乙酸乙酯含量的方法　王延云－。胡强　，李超豪　，向乐曦　，杨春林。　（１．乐山师范学院生命科学学院，四川乐山６１４０００；２．乐山市产品质量监督检验所，四川乐山６１４０００）　摘要：建立一种毛细管气相色谱法测定白酒中乙酸乙酯含量的方法。在白酒检测中，由于乙酸乙酯与乙缩醛极性　相近而难以分离。通过选择适当毛细管色谱柱，优化分析过程中的色谱条件，实现乙酸乙酯与乙缩醛良好分离，无其　他杂质干扰，采用内标法定量。结果表明，方法的检出限（信噪比Ｓ／Ｎ＝３）为Ｏ．０４　ｍｇ／Ｌ，加标回收率范围为９７．７％一　１０１．０％，相对标准偏差（ＲＳＤ）小于２．１８％，该方法满足白酒中乙酸乙酯的检测要求。　关键词：气相色谱；乙酸乙酯；乙缩醛；内标法　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｔｈｙｌ　Ａｃｅｔａｔｅ　ｉｎ　Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　Ｓｐｉｒｉｔ　ｂｙ　Ｇａｓ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ　ＷＡＮＧ　Ｙａｎ—ｙｕｎ。，ＨＵ　Ｑｉａｎｇ　，ＬＩ　Ｃｈａｏ—ｈａｏｚ，ＸＩＡＮＧ　Ｌｅ—ｘｉ２　７　ＹＡＮＧ　Ｃｈｕｎ—ｌｉｎ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＬｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌｅｓｈａｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｅｓｈａｎ　６１４０００，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｌｅｓｈａｎ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌｅｓｈａｎ　６１４０００，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｉｎ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｓｐｉｒｉｔ　ｕｓｉｎｇ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｉｎ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｓｐｉｉｔ　ｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ａｃｅｔａｌ　ｗａｓ　ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ　ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ　ｔｏ　ｂｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｂｅｃａｕｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｐｏｌａｒｉｔｙ．Ｃｈｏｏｓｉｎｇ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｌｕｍｎ，ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ａｃｅｔａｌ　ｓｅｐａｒａｔｅ　ｂｅｔｔｅｒ，ｈａｄ　ｎｏ　ｏｔｈｅｒ　ｉｍｐｕｒｉｔｙ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｉｎ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｓｐｉｒｉｔ　ｗｅｒｅ　ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ　（Ｓ／Ｎ＝３）０．０４　ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｎｇｅ　ｆｒｏｍ　９７．７％ｔｏ　１０１．０％，ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ）ｗａｓ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　２．１　８％．ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｉｎ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｓｐｉｒｉｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＧＣ）；ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ；ａｃｅｔａｌ；ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄ　中国白酒历史悠久，它与威士忌、伏特加、白兰　地、朗姆酒、金酒并称为世界六大蒸馏酒。白酒的香味　成分种类有醇类、酯类、酸类、醛酮类化合物、缩醛类、　是具有芳香的化合物，在各种香型白酒中起着重要的　作用，是形成酒体香气浓郁的主要因素，乙酸乙酯、己　酸乙酯等均为白酒的重要香味成分ｌｌ＿　。　目前白酒中乙酸乙酯含量测定的国家检测标准　是《白酒分析方法））（ＧＢ／Ｔ　１０３４５—２００９），由于检测时白　酒中存在乙缩醛，而乙缩醛与乙酸乙酯的极性相近而　芳香族化合物、含氮化合物和呋喃化合物等。而酯类　作者简介：王延云（１９７９一），女（黎），讲师，硕研，生物食品化学　方向。　●ＩｌＦ　ｌＩ￣ｔｌ－●◆），ｌ，ｌ４１ｔ＂，ｄ　的测定【ｓ］．北京：中国标准出版社，２００３：１０１—１０４　［３］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局．ＧＢ／Ｔ　２３３７７—２００９　［７］宗万里，刘新才．高效液相谱法测定面包中脱氢乙酸ｆＪ］．广州化　工，２０１　１，３９（９）：１３９－１４０　食品中脱氢乙酸的测定高效液相色谱法［ｓ】．北京：中国标准出版　社，２００９：２—３　［８］李静娜，胡汉高，黄常刚，等．高效液相色谱法同时测定食品中苯　甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠的方法研究ｆＪ１．公共卫生与预防　医学．２０１　１，２２（４）：９１—９３　【４］王若燕，王丽嫒．高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸含量的研　究【ＪＪ．中国卫生检验杂志，２００３，１３（５）：６２６—６２７　［９］王峰．超高效液相色谱法（ＵＰＬＣ）快速测定茶饮料中的咖啡因【ＪＪ＿　食品与发酵工业，２０１　１，３７（１　１）：２０４—２０６　［１０】庞楠楠，迪丽努尔・马力克．快速气相色谱法测定食品中的常见　防腐剂【Ｊ］．分析试验室，２００５（３）：１００—１０２　收稿日期：２０１２—１１—０７　［５】张辉珍，马爱国，梁惠，等．高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸　的方法研究【Ｊ］．卫生研究，２００７，３６（６）：７４８—７５０　［６】明立艳，张忠义．高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸含量［Ｊ］．食　品研究与开发，２００９，３Ｏ（３）：１０６—１０８　９２　王延云，等：气相色谱测定白酒中乙酸乙酯含量的方法　检测分析　导致保留时间相同，被误认为是乙酸乙酯，造成白酒　中乙酸乙酯含量增大的假象ｌ４　，因此，现行国标对于　白酒中乙酸乙酯的检测方法还有待改善。　解决白酒中乙酸乙酯与乙缩醛分离，准确测定乙　酸乙酯含量检测方法的报道目前有增长气相色谱柱　和在分析过程中通过加无机酸水解法对酒样进行预　处理，屏蔽掉乙缩醛干扰，乙酸乙酯形成孤峰，进行定　量分析，这些方法都是以牺牲时间和增加费用为代　价　】。本方法通过选择适当毛细管色谱柱，分别从初始　柱温、载气、程序升温等方面优化分析过程中的色谱条　件，采用内标法对白酒中乙酸乙酯进行分析，为白酒中　乙酸乙酯的定性、定量检测提供科学实验依据。　１材料与方法　１．１材料与试剂　白酒：市购。　乙醇、乙缩醛、乙酸乙酯、乙酸正戊酯：均为色谱纯。　１．２仪器与设备　岛津ＧＣ一２０１０（具有ＡＯＣ２０ｉ自动进样器、ＦＩＤ检　测器）气相色谱仪：日本岛津公司。　１．３色谱分析条件　色谱条件毛细管色谱柱１：ＬＺＰ一９３０白酒分析专　用柱（２５　ｍｘ０．３２　ｍｉｎｘ１．０　ｍ）；采用程序升温：初始温度　３５℃，保留３ｒａｉｎ，以３￣Ｃ／ｍｉｎ升至１２４　ｏＣ，再以１５￣Ｃ／ｍｉｎ　升至１８０　ｏＣ，保留３．６　ｍｉｎ，全部程序时间３６　ｍｉｎ；进样　口温度：２２０℃；进样方式：分流进样，分流比：３０；进样　量：１　ｐ，Ｌ；检测器温度：２２０　ｏＣ；载气：高纯氦气（纯度　９９．９９９％），流速１．８０　ｍＬ／ｍｉｎ。　色谱条件毛细管色谱柱２：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ－ＷＡＸ（３０　ｍ×　０．３２　ｍｍｘＯ．２５　ｍ）；采用程序升温：初始温度３０℃，保　留４　ｒａｉｎ，以５　ｑＣ／ａｒｉｎ升至６０℃，再以８　ｏＣ／ｍｉｎ升至　１８０℃，保留１　ｒａｉｎ，全部程序时间２６ｒａｉｎ；进样口温度：　２２０　ｏＣ；进样方式：分流进样，分流比：３５；进样量：１　；　检测器温度：２２０　ｃｃ；载气：高纯氦气（纯度９９．９９９％），　流速１．５４　ｍＬ／ｍｉｎ。　１．４标准溶液的配制　乙醇溶液［６０％（体积分数）１：用乙醇（色谱纯）加　水配制。　乙酸乙酯溶液［２％（体积分数）］：吸取乙酸乙酯　（色谱纯）２ｍＬ，用乙醇溶液定容至１００　ｍＬ。　乙酸正戊酯溶液【２％（体积分数）］：作内标用。吸取　乙酸正戊酯（色谱纯）２　ｍＬ，用乙醇溶液定容至１００　ｍＬ。　标准工作液：分别吸取乙酸乙酯溶液０．５０、１．Ｏ０、　２．００、４．Ｏ０、６．Ｏ０　ｍＬ，移入１００　ｍＬ容量瓶中，逐一加入内　标溶液１．００　ｍＬ，用乙醇溶液稀释至刻度。上述溶液中　乙酸乙酯浓度分别为０．０９、０．１８、０．３６、０．７２、１．０８　ｇ／Ｌ，内　标物的浓度均为０．０２％（体积分数）。　１．５样品处理　吸取白酒样品约８．０ｍＬ于１０ｍＬ容量瓶中，加入　内标溶液０．１０　ｍＬ，然后用白酒样品定容，混匀后待测。　２结果与分析　２．１　白酒样品色谱图　分别采用ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱和Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ对白酒样品中乙酸乙酯、乙缩醛进行分析，　色谱图见图１和图２。　４．５　４．Ｏ　３．５　３．ｏ　２．５　２．ｏ　１．５　１．Ｏ　０．５　０．Ｏ　－ｏ．５　Ｏ．Ｏ　２．５　５．０　７．５　１Ｏ．Ｏ　１２．５　１５．０　１７．５　２０．Ｏ　２２．５　２５．０　时间／ｍｉｎ　图１白酒样品色谱图（ＬＺＰ一９３０）　Ｆｉｇ．１　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｓｐｉｒｉｔ（ＬＺＰ一９３０）　ｌ　基　ｎ　蛩　ｌ　．　Ｌ　．ｊ　Ｏ．Ｏ　２．５　５．Ｏ　７．５　１Ｏ．０　１２．５　ｌ５．０　１７．５　时间／ｒａｉｎ　图２臼酒样品色谱图【Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ）　Ｆｉｇ．２　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｓｐｉｒｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ－ＷＡＸ）　乙酸乙酯与乙缩醛在ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱　上保留时间分别为５．５７２、５．６９７　ｍｉｎ，两色谱峰略有部　分重合；在Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ上保留时间分别为４．６９５、　４．８２０　ａｒｉｎ，两色谱峰分离良好。　２．２色谱柱的选择　国家检测标准《白酒分析方法》（ＧＢ／Ｔ　１０３４５—　２００９）中测定乙酸乙酯使用的是ＬＺＰ一９３０白酒分析专　用柱或ＦＦＡＰ毛细管色谱柱，在白酒分析中通常使用　的有ＰＥＧ柱、ＨＰ—ＩＮＮＯＷＡＸ、ＤＢ—ＷＡＸ、ＦＦＡＰ等。ＰＥＧ　检测分析　王延云，等：气相色谱测定白酒中乙酸乙酯含量的方法　柱、ＨＰ—ＩＮＮＯＷＡＸ、ＦＦＡＰ均无法分离乙酸乙酯与乙缩　醛，采用ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱和ＤＢ—ＷＡＸ柱都　能使乙酸乙酯与乙缩醛分离。　２＿３初始柱温的选择　分别选择初始柱温为３０、３５、４０、５０、６Ｏ　ｏＣ，ＩＺＰ－９３０　白酒分析专用柱于３５℃，Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ于３０℃，能　使乙酸乙酯与乙缩醛得到良好的分离效果。　２．４载气的选择　载气选择氮气，选用ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱，　乙酸乙酯与乙缩醛峰重叠，无法分离；选用Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ，乙酸乙酯与乙缩醛峰部分重叠，不能完全　分离。载气选择氦气，ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱和　Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ都能使乙酸乙酯与乙缩醛有效分离。　２．５标准曲线及方法检测限　将上述配制成的标准工作液，分别在气相色谱仪　上进行测定，以峰面积（或峰高）比为ｌ，，质量浓度比为　，得到线性回归方程，ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱为Ｙ＝　０．１５９　１０２　５　＋４．５７４　１４７￣１０￣，相关系数Ｒ＝０．９９９　９１０　４，　Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ为ｌ，＝０．２７１　２６９　１　Ｘ＋４．１　１８　２４９￣１０　，　相关系数Ｒ＝０．９９９　９４５　５，均呈现良好的线性关系。　根据方法检出限（ＬＯＤ）为基线噪音的３倍。在上　述条件下，测定方法检出限，ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱　和Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ的方法检出限分别为０．０９　ｍｇ／Ｌ　和０．０４ｍｇ／Ｌ。　２．６方法的精密度　将３个不同浓度水平的白酒样品分别在同一条　件下重复测定６次，计算相对标准偏差（ＲＳＤ），结果见　表１。　表１精密度试验结果（ｎ＝６）　Ｔａｂｌｅ１　Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｔｅｓｔｓ（ｎ＝６）　结果表明相对标准偏差（ＲＳＤ）小于２．１８％，说明　本方法精密度良好。　２．７方法的回收率　将一定量乙酸乙酯标样添加到白酒样品中，分别　按前述方法进行样品前处理和ＧＣ—ＦＩＤ分析，测定添　加回收率，见表２。　结果表明，添加回收率为９７．７％～１０１．０％，说明本　方法是准确可靠的。　９３＝＝Ｉ　表２乙酸乙酯加标回收试验结果　Ｔａｂｌｅ　２　Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔｓ　３结论　本文建立了白酒中乙酸乙酯含量的气相色谱测　定方法。该方法，从白酒分析中常使用的ＰＥＧ柱、ＨＰ—　ＩＮＮＯＷＡＸ、ＤＢ—ＷＡＸ、ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱、　ＦＦＡＰ中选择了ＬＺＰ一９３０白酒分析专用柱和Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ柱；国标《白酒分析方法》（ＧＢ／Ｔ　１０３４５—　２００９）中初始柱温为６Ｏ℃，载气为氮气，降低初始柱温　为３０　ｃＩ二（或３５℃），载气为氦气，均能提高乙酸乙酯与　乙缩醛分离度。　乙酸乙酯与乙缩醛在ＬＺＰ－９３０白酒分析专用柱上略　有部分重合，在定量分析时采用峰高计算；而在Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ－ＷＡＸ上有完全的分离则采用峰面积进行定量分析。　ＬＺＰ－９３０白酒分析专用柱的方法检出限为０．０９　ｍｇ／Ｌ高　于Ａｇｉｌｅｎｔ　ＤＢ—ＷＡＸ柱方法检出限为０．０４　ｍｇ／Ｌ。　该方法从准确度、精密度、灵敏度上可以满足白　酒中乙酸乙酯的定性、定量检测要求。　参考文献：　［１】臧光楼，司波，姜雪，等．不同前处理方式下ＧＣ—ＭＳ法分析白酒中　微量成分［Ｊ］＿酿酒，２０１　ｌ，３８（４）：５３—５６　【２］崔磊，陈建生．采用大１３径毛细管柱测定白酒中乙酸乙酯与正丙　醇检出顺序的探讨『Ｊ］．酿酒科技，２００５（６）：９６—９７　［３】北京市卫生防疫站，卫生部食品卫生监督检验所，济南市卫生防　疫站，等．ＧＢ／Ｔ　５００９．４８—２００３蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析　方法［ｓ］．北京：中国标准出版社，２０１２：４０７—４２８　【４］中国食品发酵工业研究院，泸州老窖集团股份有限公司，山西杏　花村汾酒集团有限责任公司，等．ＧＢ／Ｔ　１０３４５—２００７，白酒分析方　法［Ｓ］　Ｅ京：中国标准出版社，２００７：７—９　［５］胡坷平，程劲松，杨屹，等．快速毛细管气相色谱分析白酒中的香　味成分ＩＪ］．分析科学学报，２００８，２４（３）：３２３—３２６　［６】陈发河，吴光斌．毛细管气相色谱法测定白酒中的甲醇一乙酸乙　酯和杂醇油［Ｊ］．食品科学，２００７，２８（１）：２３２—２３４　【７］吴卫宇．毛细管气相色谱法测定白酒中多种微量成分ｆＪ１．酿酒科　技，２０１　１（５）：１０８—１０９　［８】汤道文，王卫东，汤翠红，等．毛细管柱气相色谱法测定白酒中乙　酸乙酯和乙缩醛【Ｊ］＿酿酒科技，２０１０（４）：９０—９１　［９　王会峰，９］李瑾，林秋萍．气相色谱法快速检测白酒中醇和酯【Ｊ］＿食　品科学，２００７，２８（７）：４５６—４５８　收稿日期：２０１２一ｌ１—０４