361例孕产妇珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果分析

・　３３１４　・　检验医学与临床２０１４年１２月第ｌ１卷第２３期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０１４，Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．２３　・临床研究・　３　６　１例孕产妇珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果分析　杨　夕，汪文明，张体永，刘利航，陈　嵌（重庆市南川区人民医院检验科４Ｏ８４ＯＯ）　【摘要】　目的　分析孕产妇中珠蛋白生成障碍性贫血（地贫）基因类型和频率，为优生优育提供参考和指导。　方法采用跨越断裂点聚合酶链反应（ＧＡＰ—ＰＣＲ）技术和反向斑点杂交（ＰＣＲ—ＲＤＢ）技术对３６１例地贫初筛阳性的　孕产妇进行ａ、Ｄ一地贫基因检测。结果　３６１例受检孕产妇中检出地贫１６５例，检出率４５．７１　。其中，检出ａ一地贫　７６例（２１．０５　），检出３种缺失类型，分别为一　队／ｄ　（６４．４７　）、一３，７　ｄｄ（３２．８９　）、一４，２／ｄｄ（２．６３　）；检出８一地　贫８９例（２４．６５　），检出６种基因突变类型，依次为ＣＤ１７（３９．３３　）、ＣＤ４１－４２（３０．３４　）、ＩＶＳ－Ⅱ一６５４（１　６．８５　）、　ＣＤ４３（６．７４　）、一２８（４．４９　）、一２９（２．２５　）。结论　基因检测有利于地贫的检出，开展孕产妇人群地贫基因检　测，对指导优生优育，有效防止重型地贫患儿的出生有重要意义。　【关键词】　孕产妇；　珠蛋白生成障碍性贫血；　基因检测；　基因类型　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１４．２３．０３４　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７２—９４５５（２０１４）２３—３３１４一ｏ２　珠蛋白生成障碍性贫血（简称地贫）是世界上最常见和发　病率最高的遗传性溶血性贫血，也是危害最严重的血红蛋白病　２　结　果　２．１地贫筛查结果在２　６９６例孕检的孕产妇中，经血液分　之一　。此病好发于地中海沿岸地区，我国则以南方地区多　见。目前地贫尚无有效治疗方法，在妊娠早期或中期开展产前　析ＭＣＶ、ＭＣＨ，筛查出疑似地贫（ＭｃＶ＜８０　ｆＩ　和ＭＣＨ＜２７　ｐｇ）孕产妇３６１例，经地贫基因检测确诊为地贫１６５例，地贫携　筛查和产前基因诊断，防止重型地贫儿出生，仍是目前控制地　贫发生最为有效的措施¨２＿３＿。近年来，聚合酶链反应（ＰＣＲ）和　反向斑点杂交（ＲＤＢ）技术发展迅速，现已普遍应用于地贫的基　带率为６．１２　（１６５／ｚ　６９５）。在２　６９６例孕产妇中，确诊为地　贫者１６５例，地贫携带率为６．１２　。　２．２基因检测结果３６１例受检孕产妇中检出地贫１６５例，　因诊断。本次研究采用跨越断裂点聚合酶链反应（ＧＡＰ—ＰＣＲ）　技术和ＰＣＲ结合ＲＤＢ（ＰＣＲ—ＲＤＢ）技术，对２０１２年２月至　检出率４５．７１　（１６５／３６１）。其中，检出ａ一地贫７６例，检出率　２１．Ｏ５　（７６／３６１）；检出３种缺失类型，分别为一　／ａａ　４９例　（６４．４７　）、～３，７／ａ　２５例（３２．８９　）、一４，２／　ａ　２例（２．６３　）。　２０１３年１月来本院地贫初筛阳性的３６１例孕产妇进行地贫基　因诊断，分析其基因类型及构成，为优生优育提供科学参考　依据。　１资料与方法　检出Ｂ一地贫血８９例，检出率２４．６５　（８９／３６１）；在１７种基因突　变类型中检出６种基因突变类型，依次为ＣＤ１７（３９．３３　）、　ＣＤ４１—４２（３０．３４　）、ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（１６．８５　）、ＣＤ４３（６．７４　）、　１．１一般资料　２０１２年２月至２０１３年１月来本院进行孕检　的孕产妇２　６９６例，经血液分析，平均红细胞体积（ＭＣＶ）小于　８Ｏ　ｆＩ　、平均红细胞血红蛋白含量（ＭＣＨ）小于２７　ｐｇ者为疑似　地贫孕产妇，共３６１例，年龄１９￣４４岁。　１．２　仪器与试剂　ＳｔｅｐＯｎｅ　ＲＴ—ＰＣＲ仪（美国ＡＢＩ公司），　Ｃｏｍｂｉ—Ｄ２４双层杂交仪（韩国ＦＩＮＥＭＯＵＬＤ公司）；ｄ一地贫基　２８（４．４９　）、一２９（２．２５　）。未检出ａ复合ｐ一地贫。　一地贫　基因类型及构成比，见表１。　表１　８９例孕产妇０一地贫基因突变类型及构成比　基因类型　ｎ（　）　４（４．４９）　基因类型　ＣＤ４３　ｎ（　）　６（６．７４）　２８　因检测试剂由深圳亚能生物技术有限公司提供，　地贫基因检　测试剂由深圳益生堂生物企业有限公司提供。　１．３方法　２９　２（２．２５）　ＩＶＳ一Ⅱ６５４　１５（１　６．８５）　ＣＤ１７　ＣＤ４１—４２　３５（３９．３３）　２７（３０．３４）　合计８９（１００．００）　１．３．１　地贫筛查　采用ＸＴ一４０００Ｉ血细胞分析仪对抗凝静脉　血进行ＭＣＶ、ＭＣＨ检测；符合ＭＣＶ＜８Ｏ　ｆＬ和ＭｃＨ＜２７　Ｐｇ　的孕产妇直接进行ａ一和８一地贫基因检测。　３讨　论　地贫是一组常见的常染色体隐性遗传病　］，如果夫妻双方　均为同型地贫基因携带者，其后代有１／４的概率为中间或中型　地贫患儿＿５］。明显低于广州报道１１．４７　＿６］，表明本地区不是　１．３．２基因型检测对地贫初筛阳性的孕产妇，用乙二胺四　乙酸钠（ＥＤＴＡ—Ｎａｚ）抗凝管采集静脉血２　ｍＩ　，按试剂盒操作　说明提取基因组ＤＮＡ。ａ一地贫基因诊断采用ＧＡＰ—ＰＣＲ法检　测一　、一ａ　、一　３种常见缺失型突变，０一地贫基因诊断采　地贫高发区。轻型地贫可无临床症状，重型ａ一地贫胎儿（Ｂａｒｔｓ　水肿）多在妊娠末期胎死腹中或产下即死；重型Ｇ一地贫患儿一　用ＰＣＲ－ＲＤＢ法检测１７种突变类型。具体操作步骤严格按试　剂说明书进行。　１．４统计学处理　采用ＳＰＳＳ１７．０统计学软件进行数据处　理；计数资料以百分率表示。　＊　基金项目：重庆市卫生局科研项目（２０１１－２—０５３）　般在出生后３～６个月发病，呈进行性贫血，常依靠反复输血维　持生命，并易发多种并发症，多在童年或青少年期死亡，给家庭　和社会带来沉重负担。因此，进行产前诊断预防重型地贫患儿　的出生是目前减轻疾病发生的重要手段。本次研究对采用　检验医学与临床２０１４年１２月第１１卷第２３期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０１４，Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．２３　・　３３１５　・　ＧＡＰ—ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＲＤＢ技术对３６１例地贫初筛阳性孕产妇进　行基因检测，确诊为地贫１６５例，阳性率为４５．７１　，表明基因　患者Ｂ珠蛋白基因突变分析［Ｊ］．中华检验医学杂志，　２Ｏ１０，３３（３）：２３６．　检测有利于地贫诊断，为孕产妇考虑是否选择终止妊娠提供了　快速可靠的科学参考，对指导优生优育，提高人口素质有重要　意义。因此，开展婚检、孕前、孕期中的地贫基因诊断，有利于　防止中、重型地贫患儿出生。　Ｅ２－１沈寅琛．南宁地区１４７６８例优生与遗传咨询者的分析　［Ｊ］．中国优生与遗传杂志，２００９，１７（８）：１２０．　Ｅｓ３朱慧明．２４７４３例婚检人群地中海贫血筛查情况分析ＥＪ］．　中国妇幼保健，２０１１，２６（２３）：３５９８—３５９９．　本研究结果表明，在３６１例初筛阳性的孕产妇中确诊ａ一地　贫７６例，阳性率为２１．ｏ５　，０一地贫８９例，阳性率为２４．６５　，　［４］麦凤鸣，颜双鲤．地中海贫血筛查指标的分析评价［Ｊ］．中　华全科医学，２０１３，１１（３）：３５０．　与四川、重庆地区报道的Ｂ一地贫基因携带率高于ａ一地贫相　似［　］。其中，７６例ａ一地贫孕产妇中，确诊一。　／　ａ型４９例　（６４．４７　），一ＩＸ３，７／ａａ型２５例（３２．８９　），一４，２／ａｄ型２例　（２．６３　）。表明一　／ａａ是本地区孕产妇　一地贫基因的主要缺　失型。在８９例Ｂ一地贫孕产妇中，共检出６种基因突变类型，其　中突变类型前５位分别是ＣＤ１７型、ＣＤ４１—４２型、ＩＶＳ－ＩＩ一６５４　型、ＣＤ４３型、２８型，基因构成比分别为３９．３３　、３Ｏ．３４　、　１６．８５　、６．７４　、４．４９　。表明本地区孕产妇０一突变主要类型　是ＣＤ１７型，其次为ＣＤ４１—４２型，与云南、贵州、南川Ｉ报道的主　［５］Ｎａｊｍａｂａｄｉ　Ｈ，Ｇｈａｍａｒｉ　Ａ，Ｓａｈｅｂｊａｍ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｆｏｕｒｔｅｅｎ—　ｙｅａｒ　ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ　ｏｆ　ｐｒｅｎａｔａｌ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ　ｉｎ　Ｉ　ｒａｎＥＪ］．Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ　Ｇｅｎｅｔ，２００６，９（２）：９３—９７．　－Ｉ６］唐盈，陈桂兰，何聚莲，等．１０３１例广州市育龄人群地中海　贫血基因诊断分析［Ｊ］．国际医药卫生导报，２０１３，１９　（１６）：２４６５－２４６７．　［７］王霞，江虹，贾劲，等．四川ｉ地区人群地中海贫血的筛查及　基因分析Ｉ－ｊ］．生物医学工程学杂志，２０１１，２８（１）：１３５—　１３７．　要基因突变类型相似ｌ９　ｌｌ；而与王欢等　报道重庆Ｇ一突变主要　类型略有不同，这可能与本次研究人群范围不同有关，表明不　同地域和人群的Ｇ一地贫基因突变类型的构成不尽相同。　本次研究中有１９６例地贫初筛阳性的孕产妇未检测出相　应的珠蛋白基因突变位点，存在缺铁性贫血或其他基因突变类　型。由于本次地贫基因诊断采用目前常用的ＧＡＰ—ＰＣＲ和　ＰＣＲ—ＲＤＢ技术，主要检测一　／ａａ、一ａ　／ａａ、一ａ　／ａｄ　３种缺　失型及Ｑｓ、ＣＳ、ＷＳ　３种点突变类型和我国常见１７种　地贫基　因突变位点，不能检测出其他罕见突变类型。　［８］王欢，刘申，黄君富，等．９５３例重庆地区地中海贫血基因　突变类型分析［Ｊ］．第三军医大学学报，２０１２，３４（１７）：　１８０２—１　８０４．　Ｉ－９］朱宝生，贺静，张杰，等．云南省地中海贫血基因携带者及　患者ａ和Ｂ珠蛋白基因突变谱与产前基因诊断［Ｊ］．中华　妇产科杂志，２０１２，４７（２）：８５—８９．　，１ｌＯ］马星卫，许吟，戴薇，等．贵阳地区１１４３例孕妇地中海贫　血筛查及基因检测结果分析［Ｊ］．重庆医学，２０１３，４２　（１７）：１９９０－１９９１．　综上所述，本文地贫基因诊断方法对探索建立有效的产前　地贫基因诊断提供了科学参考，其研究结果为指导本地区孕产　妇地贫的遗传咨询、携带者筛查、产前诊断提供了一定的参考　价值。　参考文献　［１１］杨夕，汪文明，安刚，等．南川地区地中海贫血基因分型的　分析Ｉ－Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１３，３４（２１）：２８３０—２８３１，　２８３４．　（收稿日期：　。　一。。一　修回日期：　。　一。　一　。）　［１］郑美琴，李伟，吕建新．温州地区汉族人群Ｊ｝地中海贫血　（上接第３３１３页）　ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｉｎｇ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ　ＤＮＡ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｐｕｌｓｅｄ—ｆｉｅｌｄ　ｇｅｌ　ｅ１ｅｃｔｒ０ｐｈｏｒｅｓｉｓ：ｃｒｉｔｅｒｉａ　ｆｏｒ　［９］Ｈｆｒｉｔｉｅｒ　Ｃ，Ｐｏｉｒｅｌ　Ｌ，Ｆｏｕｒｎｉｅｒ　ＰＥ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎａｔｕｒａｌｌｙ　ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　ｏｘａｃｉｌｌｉｎａｓｅ　ｏｆ　Ａｃｉｎｅｔ０ｂａｃｔｅｒ　ｂａｕｍａｎｎｉｉ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００５，４９　（１０）：４１７４—４１７９．　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｓｔｒａｉｎ　ｔｙｐｉｎｇ［Ｊ￣．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９５，３３（９）：　２２３３－２２３９．　［１Ｏ］Ｍｕｇｎｉｅｒ　ＰＤ，Ｐｏｉｒｅｌ　Ｌ，Ｎａａｓ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ　ｄｉｓｓｅｍｉ　ｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｌａＯＸＡ—。２３　ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　Ａｃｉｎｅｔｏ——　［６］　Ｊｅｏｎ　ＢＣ，Ｊｅｏｎｇ　ＳＨ，Ｂａｅ　ＩＫ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｓｏ—　ｃｏｍｉａｌ　ｏｕｔｂｒｅａｋ　ｏｆ　ｉｍｉｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｂａｕ—　ｍａｎｎｉｉ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｔｈｅ　ＯＸＡ一２３　ｂｅｔａ－ｌａｃｔａｍａｓｅ　ｉｎ　Ｋｏｒｅａ　ｂａｃｔｅｒ　ｂａｕｍａｎｎｉｉ￣Ｊ］．Ｅｍｅｒｇ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，２０１０，１６（１）：３５—　４０．　Ｉ－ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００５，４３（５）：２２４１—２２４５．　Ｊ　Ｈ，Ｙｏｎｇ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｖｅｌ　ａｃｑｕｉｒｅｄ　ｍｅｔａｌｌｏ—ｂｅ—　［７］　Ｌｅｅ　Ｋ，Ｙｕｍ　ｔａ—ｌａｃｔａｍａｓｅ　ｇｅｎｅ，ｂｌａ（ＳＩＭ一１），ｉｎ　ａ　ｃｌａｓｓ　１　ｉｎｔｅｇｒｏｎ　ｆｒｏｍ　［１　１］Ｐｅｌｅｇ　ＡＹ，Ｓｅｉｆｅｒｔ　Ｈ，Ｐａｔｅｒｓｏｎ　ＤＬ．Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｂａｕ—　ｍａｎｎｉｉ：ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ　ｏｆ　ａ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ　ｐａｔｈｏｇｅｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｍｉ—　ｃｒｏｂｉｏｌ　Ｒｅｖ，２００８，２１（３）：５３８－５８２．　Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｂａｕｍａｎｎｉｉ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｋｏｒｅａ［Ｊ］．　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００５，４９（１１）：４４８５—４４９１．　－１１２］Ｗａｎｇ　Ｘ。Ｚｏｎｇ　Ｚ。Ｌｎ　Ｘ．Ｔｎ２００８　ｉｓ　ａ　ｍａｊｏｒ　ｖｅｈｉｃｌｅ　ｃａｒｒｙ—　ｉｎｇ　ｂｌａ（ＯＸＡ一２３）ｉｎ　Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｂａｕｍａｎｎｉｉ　ｆｒｏｍ　Ｃｈｉｎａ　ｉｎｇｔｏｎ　ＭＪ，Ｃｏｅｌｈｏ　ＪＭ，ｅｔ　ａ１．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　［８３　Ｗｏｏｄｆｏｒｄ　Ｎ，ＥｌｌＰＣＲ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｐｒｅｖａｌｅｎｔ　０ＸＡ　ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓ　［Ｊ］．Ｄｉａｇｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，２０１１，６９（２）：２１８—２２２．　（收稿日期：２０１４—０４—１６　修回日期：２０１４—０６—１２）　ｉｎ　Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐｐｌ＇Ｊ￣．Ｉｎｔ　Ｊ　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ　Ａｇｅｎｔｓ，２００６，　２７（４）：３５１－３５３．