夹竹桃内生真菌R22的次生代谢产物研究

第３４卷第６期　陕西科技大学学报　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｖｏ１．３４　Ｎｏ．６　Ｄｅｃ．２０１６　２０１６年１２月　文章编号：１０００—５８１１（２０１６）０６—０１２５—０５　夹竹桃内生真菌Ｒ２２的次生代谢产物研究　马养民，乔　珂，李梦云，郭林新，范　超　（陕西科技大学教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室，陕西西安　７１００２１）　摘　要：为探究夹竹桃内生真菌Ｒ２２次生代谢产物的结构和活性，采用硅胶柱色谱、Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ一２Ｏ柱色谱、重结晶等方法对该菌株的发酵产物进行分离、纯化，并结合所得化合物的理化　性质和波谱数据鉴定其结构．通过二倍稀释法对其次生代谢产物进行抑茵活性测试．最终从其　发酵产物中分离得到六个化合物．经鉴定分别为丁二酸（１）、十六烷酸ａ一单甘油酯（２）、３一甲基一　４一喹唑啉酮（３），ｃｙｃｌｏｐｅｎｏｌ（４）、尿囊素（５）、腺苷（６）．其中化合物３为首次从自然界中分离得　到，化合物５对植物病原真菌具有一定的抑菌活性．　关键词：夹竹桃；内生真菌；青霉属；次生代谢产物；抑茵活性　中图分类号：Ｏ６２９　文献标志码：Ａ　Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｆ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ａｎ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　Ｒ２２　ｏｆ　Ｎｅｒｉｕｍ　ｉｎｄｉｃｕｍ　ＭＡ　Ｙａｎｇ—ｍｉｎ，ＱＩＡＯ　Ｋｅ，ＬＩ　Ｍｅｎｇ—ｙｕｎ，ＧＵＯ　Ｌｉｎ—ｘｉｎ，ＦＡＮ　Ｃｈａｏ　（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｕｘｉｌｉａｒｙ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ。Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｘｉ　ａｎ　７１００２１，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｕｓ　ｆｒｏｍ　Ｒ２２　ｓｔｒａｉｎ　ｉｎ　Ｎｅｒｉｕｍ　ｉｎｄｉｃｕｍ，ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｉｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｒ２２　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｃｏｌｕｍｎ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ一２０　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｒｅｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ＳＯ　ｏｎ．　Ｔｈｅｉｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅｉｒ　ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｄａｔａ．　Ａｎｄ　ａｎ　ＭＩＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａ８　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｅｓｔ．Ｓｉｘ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｆｒｏｍ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒ２２　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　ｓｕｃｃｉｎｉｃａｃｉｄ（１），ｄａｔｕｒｉｃ　ａｃｉｄ一２，３－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｅｓｔｅｒ（２），３一ｍｅｔｈ—　ｙｌｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ一４（３Ｈ）一ｏｎｅ（３），ｃｙｃｌｏｐｅｎｏｌ（４），ａｌｌａｎｔｏｉｎ（５），ａｄｅｎｏｓｉｎｅ（６）．Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　３　ｗａｓ　ｉ—　ｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｎａｔｕｒａ１　ｗｏｒｌｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　５　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｓｏｍｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅ　ｐｈｙｔ０ｐａｔｈｏｇｅｉｃ　ｆｕｎｇｉ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｎｅｒｉｕｍ　ｉｎｄｉｃｕｍ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｕｓ；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ；ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ；ａｎｔｉ—　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｊｖｉｔｊａｓ　收稿日期：２０１６－０９—２３　基金项目：陕西省科技厅自然科学基础研究计划项目（２０１４ＪＺ００３）　作者简介：马养民（１９６３一），男，陕西咸阳人，教授，博士生导师，研究方向：天然产物化学　・　１２６　・　陕西科技大学学报　第３４卷　０引言　植物内生真菌的次生代谢产物具有抗菌＿１］、抗　炎　引、抗氧化　、抗肿瘤　等生物活性，为新药研　发提供了强大的物质基础＿６　］．由于药用植物内生　真菌次生代谢产物更具独特性＿８］，因而近年来药用　植物内生真菌代谢产物的研究越来越受到人们的　重视　］．夹竹桃（Ｎｅｒｉｕｍ　ｉｎｄｉｃｕｍ）为我国民间常　用中药，具有强心利尿、抗麻风、杀虫、祛痰定喘、镇　痛的药理功能　．目前，国内外对夹竹桃活性成分　研究报道多集中于其植物方面＿１　］，而对其内生　真菌次生代谢产物的研究报道较少．本课题以从夹　竹桃根部分离得到的一株内生真菌（编号为Ｒ２２）　为研究对象，对其进行固态发酵，从其发酵产物中　分离得到６个化合物，并对所得化合物进行了抑菌　活性测试，以期为进一步开发和利用夹竹桃内生真　菌奠定理论基础．　１材料与方法　１．１　菌株　从秦岭地区的夹竹桃根部分离得到内生真菌　Ｒ２２，在４℃下用ＰＤＡ培养基保存于实验室．活性　测试菌株：革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌、乳酸链　球菌），革兰氏阴性菌（大肠杆菌、绿脓杆菌），植物　病原真菌（苹果腐烂病菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉　病菌、番茄灰霉病菌、烟草赤星病菌、白菜黑斑病　菌、玉米大斑病菌、葡萄炭疽病菌、辣椒疫霉病菌、　芍药炭疽病菌）．以上测试菌均保存于实验室．　１．２仪器、培养基与试剂　（１）仪器：ＲＥ５２ＣＳ－１旋转蒸发仪，上海亚荣生　化仪器厂；Ｂｒｕｋｅｒ　ａｖａｎｃｅ　ｌｌＩ－４００　ＭＨｚ型核磁共振　仪，德国布鲁克公司；柱色谱硅胶２００～３００目，青　岛海洋化工厂分厂；薄层色谱硅胶Ｇ，青岛海浪硅　胶干燥剂厂；柱色谱凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ一２０，青岛海　浪硅胶干燥剂厂．　（２）培养基与试剂：察氏培养基（葡萄糖３０　ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４　１．０　ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．５　ｇ／Ｌ，　ＮａＮＯ３　３．０　ｇ／Ｌ，ＫＣ１　０．５　ｇ／Ｌ，ＦｅＳＯ４　０．０１　ｇ／Ｌ），牛肉膏蛋白胨液体培养基（牛肉膏５　ｇ，蛋白　胨１０　ｇ，ＮａＣ１　５　ｇ，Ｈ２　Ｏ　１　０００　ｍＬ，ｐＨ　７．０），马铃　薯葡萄糖（ＰＤＡ）培养基（２Ｏ　９／６马铃薯浸汁１　０００　ｍＬ，葡萄糖２０　ｇ，琼脂２０　ｇ，自然ｐＨ），所用试剂　均为国产分析纯．　１．３菌种鉴定　（１）形态学鉴定：将菌株Ｒ２２接种于ＰＤＡ平　板上，于２８℃下培养５　ｄ，至孢子成熟，观察记录菌　落、菌丝生长状态．　（２）分子生物学鉴定：将菌株Ｒ２２接种于ＰＤＡ　斜面培养基，在２８℃下培养５　ｄ至孢子成熟，利用　ＣＴＡＢ法提取菌丝体基因组ＤＮＡ做为模板，通过　引物ＩＴＳ１和ＩＴＳ４扩增目标菌株的１８Ｓ　ｒＤＮＡ的　ＩＴＳ区ｒ－¨］．将测序获得的ＩＴＳ序列在Ｇｅｎｂａｎｋ数　据库中进行Ｂｌａｓｔ分析，采用软件ＭＥＧＡ　５．０（邻　接法ＮＪ）构建系统发育进化树，对菌株Ｒ２２与数　据库中登陆的近源菌株系统发育进化树关系进行　分析．　１．４发酵与代谢产物的分离　（１）内生真菌的发酵：菌株Ｒ２２经过活化后，　从斜面接种到装有４００　ｍＬ察氏培养基的１　０００　ｍＬ锥形瓶中，在２８。Ｃ、１２０　ｒ／ｍｉｎ下振荡培养５　ｄ　制备成种子培养液．将装好大米培养基（７５　ｇ大　米，９Ｏ　ｍＬ无糖察氏培养基）的发酵瓶于１２０。Ｃ下　灭菌２Ｏ　ｒａｉｎ，然后按照１０　９／５的（２）接种量将种子培　养液接种于上述大米培养基中，共计接种４２０瓶，　在２８。Ｃ下静置培养３０　ｄ．　（２）代谢产物的提取与分离：将阴干的发酵产　物（１５．９　ｋｇ）用乙酸乙酯和甲醇分别反复提取，提　取液经减压蒸馏得到浸膏２０００　ｇ．采用硅胶柱色谱　对粗浸膏进行分离，以石油醚、石油醚／乙酸乙酯一　１　ｔ　１、乙酸乙酯、乙酸乙酯／甲醇一１：１、甲醇为溶　剂进行梯度洗脱，得到５个部分（Ｆｒ．Ａ～Ｅ）．Ｆｒ　Ｂ　（１４５　ｇ）以石油醚／乙酸乙酯／甲醇为溶剂进行梯度　洗脱，重结晶得到化合物１（１００　ｍｇ）、２（１００　ｍｇ）、３　（１２０　ｍｇ）、４（２．５　ｇ），Ｆｒ．Ｄ（１　２６０　ｇ）以乙酸乙酯／　甲醇为溶剂进行梯度洗脱并采用Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０　柱色谱法分离得到化合物５（１００　ｍｇ）、６（２００　ｍｇ）．　所有化合物经过　Ｈ—ＮＭＲ和¨Ｃ—ＮＭＲ分析确定　其结构．　１．５抑菌活性测试　细菌培养基为牛肉膏蛋白胨液体培养基，植物　病原真菌培养基为ＰＤＡ（不加琼脂）培养基．根据　二倍稀释法ｌ＿１　，将待测化合物溶解于ＤＭＳＯ溶剂　中，配成质量浓度为１　ｍｇ／ｍＬ的样品溶液．将培　养基按照每孑Ｌ　１００　Ｌ的量依次加入到９６孑Ｌ板中，　再向第１个孔中加入上述样品溶液１００　Ｌ混合均　匀，从第１孔中吸取１００　Ｌ于第２孔中混合均匀，　再从第２孔中吸取１００　Ｌ于第３孔中混合均匀，　依此法连续稀释至第１Ｏ孔，从第１０孑Ｌ中吸取１００　Ｌ弃去，第１１孔和第１２孑Ｌ分别作为培养基和　ＤＭＳＯ溶剂阴性对照．第１～１０孔中化合物的质　第６期　马养民等：夹竹桃内生真菌Ｒ２２的次生代谢产物研究　Ｇ丁ＧＡ　・１２７・　Ｔ℃ＣＡ　ＡＣＣＴＣＣＣＡＣＣＣ　量浓度依次为５００，ｕｇ／ｍＬ、２５０　Ｉ￣ｇ／ｍＬ、１２５，ｇ／　ｍＬ、６２．５／￣ｇ／ｍＬ、３１．２　ｐｇ／ｍＬ、１５．６，ｕｇ／ｍＬ、７．８　，ＧＴＧＴＴＤ　ＣＧＣＣＴ１　ｎ、ＡＣＣ丌Ｇ　ＡＣＧＣＣ　ｕｇ／ｍＬ、３．９／￣ｇ／ｍＬ、１．９５／￣ｇ／ｍＬ和０．９８／￣ｇ／ｍＬ．　用培养基配制浓度为１０　ＣＦＵ／ｍＬ的活性测试菌　悬液，向每孔中加入１００　Ｌ菌悬液．选用青霉素钠　作为革兰氏阳性菌的阳性对照，硫酸链霉素作为革　兰氏阴性菌的阳性对照，多菌灵作为植物病原真菌　的阳性对照．上述每组进行３次平行试验，将细菌　试验组的９６孔板置于３７℃培养２４　ｈ、植物病原真　菌试验组的９６孑Ｌ板置于２８℃培养４８　ｈ后观察并　记录结果．　Ｇ　ＡＡＡ　Ｃ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　ＡＡＡＣ，ｒ１　Ｇ　Ｇ　ＡＡ　ｒ，Ｉ　］　ＡＡＣＡＡＣＧＧ　Ｃ　ｑ　Ｃ　Ｇ　ＣＧ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　》　ｃ　Ｇ　ｃ　ＣＧ　Ｃ　Ｇ　Ｃ　姐ｖ工℃ＣＧＧＧＧＧＧＣＡｒ　ＧＣ　ＣＴＧ１　：ＣＧＡＧＣＧＴＣＡＴ１　ＧＧＣＩｖｒＧＴＧＴＧＴＴＩ　ＣＣＴＣＡ　ＡＧＣＣＣ　ＣＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＧ　Ｉ１℃　２结果与讨论　２．１　菌株Ｒ２２的鉴定　ＣＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＣＣＣＧＡＡＡＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧ　ＣＡＯ０　ＣＧＴＣＣＧ　ＴＣＣｒ０ＧＡ０ＣＧＴＡＴＧＧＧＧＣ　７了　（１　Ｃ；　１（７６　对菌株Ｒ２２进行形态学鉴定，其菌落外观初　期为白色，随后变成翠绿色，后期为墨绿色；显微镜　下能够明显观察到其分生孢子梗形如扫帚，因此初　ＴＴＧＣＣＧＡｒＣＡＡＣＣＣＡＡＡｒＴＴＴＴｌＡＴＣＣＡＧＧ＿１　ｒＧ　ＡＣＣＴＣＧＧＡＴＣＡＧＴＡＧＧＧＡＴＡＣＣＣＧ）．综合形　步确定菌株Ｒ２２为青霉属，如图１所示．对其进行　分子生物学鉴定，ＰＣＲ扩增片段经测序表明，目标　菌种的ＩＴＳ序列同ＧｅｎＢａｎｋ的基因序列相对比，　态学特征和ＩＴＳ序列分析结果如图２所示，最终　确定菌株Ｒ２２为青霉属Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ．　与青霉属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）的同源率达到９８　（内生　真菌Ｒ２２的ＧｅｎＢａｎｋ序列号为ＫＵ３５９７７６，基因序　列为：　（　ＴＡＧＧ，】、ＧＡＡ（　Ｔ　（　ＡＡＧＧＡＴＣＡＴＴＡＣ（、ＧＡ　图１　菌株Ｒ２２的形态学特征　９８　ｒ——————－ＫＰ６８６４６３．１ｌ　ＰｅｎｉｃｉＵｉｕｍ　ｓｐ．ＢＡＢ一４６６３　———．。—————　广—　＿Ｌ　Ｒ２２　．Ｌ————————————————一ＮＲ　１１９４９４１Ｉ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｏｌｉｔｕｍＦＲＲ９３７　广———Ｉ　Ｌ———————————————一ＡＪ００５４８８．１Ｉ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｍ（ＩＢＴ　６２１５）　Ｉ　［『一————————。　ＡＦＹ２３１８８。４７４８５７．１‘ＩＰｅ。ｎ　ｉｃ　ｉｌｌｉｕｍ　　ａｌ　ｌｉｒａｉ　ｎｔｉｅ。ｒｇｎｒａｉ。ｌｔｅ　ａ　ｎ　。ｄ　ｐ　。　广—————－ＮＲ一１１１１４３．１ｉ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｌｕｍ　ｃｏｍｍｕｎｅ　ＣＢＳ３１１．４８　——　———　厂—一——一ＡＪ００５４９２．１Ｉ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｐｏｌｏｎｉｃｕｍ（ＩＢＴ１１３８８）　ＤＱ６５７８５２．１１　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ．Ｄｚｆ６　图２　基于ＩＴＳ序列基础上的菌株Ｒ２２系统发育分析　２．２　化合物结构鉴定　（２）、３一甲基一４一喹唑啉酮（３），ｃｙｃｌｏｐｅｎｏｌ（４）、尿囊素　（５）、腺苷（６）．化合物１～６的结构式如图３所示．　从菌株Ｒ２２的固体发酵物中共分离得到６个　化合物，分别为丁二酸（１）、十六烷酸ａ一单甘油酯　ｏ　Ｈ　ｌｌ　ｏ　ｏ　ｏＨ　ｏ　Ｏ／＂￣ＯＨ　ｏＨ　化合物１　化合物２　化合物３　・　１２８　・　陕西科技大学学报　第３４卷　ｏ　ｏＨ　ｏ　Ｎ　ｏ　Ｈ　ＮＨ　／＾＼ＮＨ２　。　０　ｏＨ　ＯＨ　化合物４　化合物５　化合物６　图３　化合物１～６的化学结构　化合物１：无色针状结晶（甲醇），ｍｐ：１８９℃～　１９Ｏ℃．　Ｈ—ＮＭＲ（４００　ＭＨｚ，ＤＭＳ０－ｄ６）　（ｐｐｍ）：　１２．１６（２Ｈ，ｓ，Ｈ—Ｃ０ＯＨ），２．４２（４Ｈ，ｓ，２一Ｈ，３一　Ｈ）；　Ｃ－ＮＭＲ（１００　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）　（ｐｐｍ）：　１７３．５６（Ｃ—ＣＯＯＨ），２８．７２（２一Ｃ，３一Ｃ）．核磁数据与　文献［１５］一致，确定化合物１为丁二酸．　化合物２：白色块状结晶（氯仿），ｍｐ：６８℃～　６９℃．　Ｈ—ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳ０一ｄ６）　（ｐｐｍ）：　４．２１（２Ｈ，１２１，１．Ｈ），３．９６（１Ｈ，ｍ，２一Ｈ），３．７１（２Ｈ，　ｍ，３－Ｈ），２．３７（２Ｈ，ｔ，５一Ｈ），１．２７（２６Ｈ，ｍ），０．９　（３Ｈ，ｔ，２０一Ｈ）；　Ｃ＿ＮＭＲ（１００　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）　（ｐｐｍ）：１７３．９Ｏ（４一Ｃ），６９．７６（２～Ｃ），６４．６６（１一Ｃ），　６２．８２（３一Ｃ），３３．６７（５一Ｃ），２２．２１～３３．６７（６～ｌ９一　ｃ），１３．６４（２Ｏ—ｃ）．核磁数据与文献［１６］一致，确定　化合物２为十六烷酸ａ一单甘油酯．　化合物３：白色固体（甲醇），ｍｐ：１０４℃～１０５　℃．　Ｈ—ＮＭＲ（４ＯＯ　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ—ｄ６）　（ｐｐｍ）：８．４３　（１Ｈ，ｓ，６一Ｈ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ一８．４　Ｈｚ，２一Ｈ），７．７９　（１Ｈ，ｄ，，＝６．７　Ｈｚ，９－Ｈ），７．７８—７．８４（１Ｈ，ＩＴＩ，８一　Ｈ），７．５５（１Ｈ，ｔ，Ｊ一７．６　Ｈｚ，７－Ｈ），３．６５（３Ｈ，ｓ）；¨　Ｃ—ＮＭＲ（１００　ＭＨｚ，ＤＭＳ０－ｄ６）３（ｐｐｍ）：１６Ｏ．９７（４一　Ｃ），１４７．３６（５一Ｃ），１４６．３９（２一Ｃ），１３３．８１（９一Ｃ），　１２６．９６（１Ｏ～Ｃ），１２６．７１（８一Ｃ），１２６．１１（７一Ｃ），１２１．３６　（６一Ｃ），３３．７１（３－ＣＨ。）．核磁数据与文献［１７］一致，　确定化合物３为３一甲基一４一喹唑啉酮．　化合物４：白色结晶（甲醇），ｍｐ：２１５℃～２１７　℃．　Ｈ—ＮＭＲ（４００　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ—ｄ６）　（ｐｐｍ）：　１０．８４（１Ｈ，ｓ，１一Ｈ），９．４６（１Ｈ，ｓ，１５一ＯＨ），７．５４　（１Ｈ，ｔ，Ｊ：７．７　Ｈｚ，８一Ｈ），７．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ：７．８　Ｈｚ，９一Ｈ），７．１１（１Ｈ，ｔ，Ｊ：７．５　Ｈｚ，７－Ｈ），７．Ｏ２　（１Ｈ，ｍ，６～Ｈ），６．９８（１Ｈ，ｔ，Ｊ一７．８　Ｈｚ，１７一Ｈ），　６．７１—６．６４（１Ｈ，ｒｎ，１６一Ｈ），６．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ：１．９　Ｈｚ，１４一Ｈ），６．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ一７．６　Ｈｚ，１８一Ｈ），４．２６　（１Ｈ，ｓ，１０一Ｈ），３．０７（３Ｈ，ｓ，４－ＣＨ３）；¨Ｃ—ＮＭＲ　（１００　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ—ｄ　）　（ｐｐｍ）：１６５．９２（２一Ｃ），　１６５．３（５一Ｃ），１５６．８３（１５一Ｃ），１３５．０３（１１一Ｃ），１３２．３　（８一Ｃ），１３２．２８（１３一Ｃ），１３０．４７（６－Ｃ），１２８．８６（４，－　Ｃ），１２６．４（１２一Ｃ），１２４．１９（７－Ｃ），１２１．０１（９一Ｃ），　１１６．９２（１８一Ｃ），１１５．６３（１５一Ｃ），ｌ１２．６８（１４－Ｃ），　７０．Ｏ８（３一Ｃ），６３．６７（１０一Ｃ），３０．８３（４一ＣＨ３）．核磁数　据与文献［１８］一致，确定化合物４为ｃｙｃｌｏｐｅｎｏ１．　化合物５：白色粉末（甲醇），ｍｐ：２２６℃～２２８　。Ｃ．　Ｈ—ＮＭＲ（４００　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ—ｄ　）　（ｐｐｍ）：　１Ｏ．５６（１Ｈ，ｓ，１一ＮＨ），８．０８（１Ｈ，ｓ，３－ＮＨ），６．９１　（１Ｈ，ｄ，Ｊ一８．１　Ｈｚ，６一ＮＨ），５．８１（２Ｈ，ｓ，８一ＮＨ２），　５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１　Ｈｚ，４一Ｈ）；¨Ｃ—ＮＭＲ（１００　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）　（ｐｐｍ）：１７３．５５（５一Ｃ），１５７．２９　（７一Ｃ），１５６．７１（２一Ｃ），６２．３６（４－Ｃ）．核磁数据与文献　［１９］一致，确定化合物５为尿囊素．　化合物６：无色晶体（甲醇），ｍｐ：２３４℃～２３６　℃．　Ｈ—ＮＭＲ（４００　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ—ｄ　）　（ｐｐｍ）：８．３６　（１Ｈ，ｓ，８一Ｈ），８．１４（１Ｈ，ｓ，２一Ｈ），７．３８（２Ｈ，ｓ，６一　ＮＨ２），５．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ一６．０　Ｈｚ，１　一Ｈ），５．４８（１Ｈ，　ｄ，Ｊ＝６．０　Ｈｚ，４　一０Ｈ），５．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ一６．ｏ　Ｈｚ，　４．５　Ｈｚ，５　一ＯＨ），５．２１（１Ｈ，ｔ，Ｊ一４．２　Ｈｚ，３　一　ＯＨ），４．６２（１Ｈ，１ＴＩ，２　Ｈ），４．１３（１Ｈ，ｒｎ，３　ｒ＿Ｈ），　３．９７（１Ｈ，ｒｎ，４　－Ｈ），３．５５～３．６７（２Ｈ，１ＴＩ，５Ｉ＿　Ｈ）；¨Ｃ—ＮＭＲ（１ＯＯ　ＭＨｚ，ＤＭＳＯ—ｄ６）　（ｐｐｍ）：　１５６．１２（６一Ｃ），１５２．３３（２一Ｃ），１４８．９８（４～Ｃ），１３９．８８　（８一Ｃ），１１９．３１（５一Ｃ），８７．８３（１　－Ｃ），８５．８５（４　一Ｃ），　７３．３５（２，＿Ｃ），７０．６３（３『－Ｃ），６１．６３（５　－Ｃ）．核磁数据　与文献［２Ｏ］一致，确定化合物６为腺苷．　２．３化合物抑茵活性　以４株细菌和１０株植物病原真菌为测试菌，　对６个单体化合物进行抑菌活性测试，测试结果如　表１所示．测试结果与阳性对照相比显示化合物５　对植物病原真菌具有一定的抑菌活性，尤其对葡萄　炭疽病菌、玉米大斑病菌、烟草赤星病菌、白菜黑斑　病菌和油菜菌核病菌的最小抑菌浓度为６２．５　ｇ／　ｍＬ，与阳性对照结果相当．　第６期　马养民等：夹竹桃内生真菌Ｒ２２的次生代谢产物研究　・　１２９　・　表１　化合物１～６对各测试菌的最小抑菌浓度　注：Ａ：大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ），Ｂ：绿脓杆菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ），Ｃ：金黄色葡萄球菌（Ｓ　ｚ０ｃ０ｆｍｓ　ａｕｒｅｕｓ），Ｄ：乳酸链球　菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｌａｃｔｉｓ），Ｅ：小麦赤霉病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ），Ｆ：葡萄炭疽病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｇ＾０∞ｓ　０ｒ　０　Ｐｓ），Ｇ：玉米大斑病菌　（Ｓｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａｔｕｒｃｉｃａ），Ｈ：烟草赤星病菌（Ａｌｔｅｒａｎｒｉａｌｏｎｇｉｐｅｓ），Ｊ：白菜黑斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ），Ｊ；油菜菌核病菌（Ｓｏｌｅｒｏｔｏｎｉｄｓ　ｃｌｅ—　ｒｏｔｉｏｒｕｍ），Ｋ：番茄灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｍａ），Ｌ；辣椒疫霉病菌（Ｐｈｙｔｏｐ　ｈｔｈｏｒａｃａｐｓｉｃ），Ｍ：苹果腐烂病菌（Ｖａｌｓａ　ｍａｌｉ），Ｎ：芍药炭疽病菌　（Ｐｅｏｎｙ　ｌｏｎｇｉｐｅｓ），“一”：未设置试验．　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　３　结论　［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００２，１０６（９）：９９６—１　００４．　从夹竹桃内生真菌Ｒ２２的发酵物中分离得到　［７］Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ　Ｒ　Ｊ，Ｗｈｉｔｅ　Ｊ　Ｆ　Ｊ，Ａｒｎｏｌｄ　Ａ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｆｕｎｇａｌ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ：Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｒｏｌｅｓ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙ—　６个化合物，分别为丁二酸、十六烷酸　一单甘油酯、　ｔｏｌ，２００９，１８２（２）：３１４—３２６．　３一甲基－４－喹唑啉酮、ｃｙｃｌｏｐｅｎｏｌ、尿囊素、腺苷，其中　［８］易晓华．植物内生真菌次生代谢产物研究进展［Ｊ］．中国农　化合物３为首次从自然界中分离得到，表明内生真　学通报，２００９，２５（２１）：２５５—２６０．　菌Ｒ２２的代谢产物具有多样性．抑菌测试结果表　［９］刘蕴哲，何劲，张杰，等．植物内生真菌及其活性代谢　明尿囊素具有一定的抑菌作用．　产物研究进展ＦＪ］．菌物研究，２００５，３（４）：３０—３６．　［１Ｏ］邢晓娟．夹竹桃的药理作用与临床应用［Ｊ］．现代医药卫　生，２００７，２３（１６）：２　４６６．　参考文献　［ｉ１］Ｖｉｎａｙａｇａｍ　Ａ，Ｓｕｄｈａ　Ｐ　Ｎ．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｎｅｒｉｕｍ　ｉｎｄｉｃｕｍ　［１３　Ｌｕｏ　Ｊ，Ｙａｎ　ｚ　Ｙ，Ｇｕｏ　Ｘ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｌｏｗｅｒｓ．［Ｊ］．Ｉｎｄｉａｎ　Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，２０１５，９２（７）：１　１４３—　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｎ　ｅｕ—　１　１４８．　ｐｈｏｒｂｉａ　ｎｅｍａｔｏｃｙｐｈａ　ｈａｎｄ［Ｊ］．Ｍａｚｚ．Ｈｕａｘｉ　Ｙａｏｘｕｅ　［１２］Ｄｅｒｗｉｃｈ　Ｅ，Ｂｅｎｚｉａｎｅ　ｚ，Ｂｏｕｋｉｒ　Ａ．Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　Ｚａｚｈｉ，２００７，２Ｚ（４）：３８０—３８２．　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　０ｉｌ　ｆｒｏｍ　ｆｌｏｗ—　［２］Ｗｅｂｅｒ　Ｄ，Ｓｔｅｒｎｅｒ　Ｏ，Ａｎｋｅ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｐｈｏｍｏｌ，ａ　ｎｅｗ　ａｎｔｉｉｎ—　ｅｒｓ　ｏｆ　ｎｅｒｉｕｍ　ｏｌｅａｎｄｅｒ［Ｊ］．Ｅｊｅａｆｃｈｅ，Ｅｌｅｃｔｒｏｎ．Ｊ．Ｅｎｖｉ—　ｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ　ｆｒｏｍ　ａｎ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉ—　ｒｏｎ．，Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２０１０，９（６）：１　０７４—１　０８４．　ｎａｌ　ｐｌａｎｔ　Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ　ｃｒｉｓｔａ—ｇａｌｌｉ［Ｊ］．Ａｎｔｉｂｉｏｔ，２００４，５７（９）：　［１３］曹永军，程　萍，喻国辉，等．利用ＩＴＳ１和ＩＴＳ４通用引　５５９—５６３．　物扩增香蕉枯萎病菌核酸片段鉴定其生理小种［Ｊ］．热带　［３］Ｓｔｒｏｂｅｌ　Ｇ，Ｆｏｒｄ　Ｅ，Ｗｏｒａｐｏｎｇ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｓｏｐｅｓｔａｃｉｎ，ａｎ　ｉｓｏ—　作物学报，２０１０，３１（７）：１　０９８—１　１０２．　ｂｅｎｚ０ｆｕｒａｎｏｎｅ　ｆｒｏｍ　ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ　ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ，ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ　［１４］Ｂｈａｒａｔｅ　Ｓ　Ｂ，Ｋｈａｎ　Ｓ　Ｉ，Ｙｕｎｕｓ　Ｎ　Ａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｐｒｏｔｏｚｏ—　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　ａｌ　ａｎｄ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｏ—－ａｌｋｙｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｆｏｒｍｙ—．　２００２，６０（２）：１７９－１８３．　１ａｔｅｄ　ａｃｙｌｐｈ１ｏｒｏｇ１ｕｃｉｎ０ｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２００７，　［４］Ｍａ　Ｗ，Ｌｉｕ　Ｗ，Ｌｉ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　１５（１）：８７－９６．　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｗｈｉｃｈ　ｃｏｍｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　［１５］Ｚｈａｎｇ　Ｊ，Ｈｏｕ　Ｆ，Ｌｕ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ－ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ—　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ＳＹ一２５　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｗａｙｓ　ｏｆ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｇＹ　ｄｉｓｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｒｂａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｓｏ—　口］．Ｚｈ￣ｉａｎｇ　Ｚｈｏｎｇｙｉｙａｏ　Ｄａｘｕｅ　Ｘｕｅｂａｏ，２０１４，３８（１０）：　ｌｕｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ—ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ　１　２１２—１　２１６．　ｓｔｒａｔｅｇｙ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ　Ｍｅｔａｂ．，２０１２，１３（５）：５５８—５７６．　［５］Ｄｅｎｇ　Ｃ　Ｍ，Ｓ　Ｘ，Ｈｕａｎｇ　Ｃ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　［１６］刘劲松，王刚，董超，等．花生茎叶化学成分研究［Ｊ］．　ｏｆ　ａ　ｍａｎｇｒｏｖｅ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｅ　ｆｕｎｇｕｓ　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｕｓ　中成药，２００８，３０（３）：４１９－４２１．　（Ｎｏ．ＧＸ７—３Ｂ）ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｓｅａ［Ｊ］．Ｍａｒ．Ｄｒｕｇｓ，　（下转第１３４页）　２Ｏｌ３，１１（７）：２　６１６－２　６２４．　［６］Ｓｃｈｕｌｚ　Ｂ，Ｂｏｙｌｅ　Ｃ，Ｄｒａｅｇｅｒ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ：Ａ　・１３４・　陕西科技大学学报　［２］张功，瑞君，峥第３４卷　嵘．平菇浸汁促进嗜酸乳杆菌生长的　表２发酵过程中的活菌数变化　时间　活菌数／（Ｘ　１０９　ｃｆｕ／ｍＬ）　时间　活菌数／（Ｘ　１０　０　ｃｆｕ／ｍＬ）　／ｈ　实验值理论值误差／　／ｈ　实验值理论值误差／　０　４　８　１２　１６　２０　２４　２８　０．００５　３　０．００５　８２　８．９３　０．Ｏ１４　０．０１５　３１　８．５５　０．０３９　０．０４０　１８　２．９３　０．０９９　０．１０５　０４　５．７５　０．２５７　０．２７Ｉ　５３　５．３５　０．６４９　０．６８２　６６　４．９３　ｉ．５８２　１．４６９　３３—７．６７　３．１６９　３．３１１　６５　４．３１　３２　３６　４０　４４　４８　５２　５６　６０　５．４３２　５．５４５　９２　２．０５　７．３９３　７．４５７　５６　０．８７　８．６１３　８．５８１　４１９．２１３　９．１０２　６１—０．３７　—１．２ｉ　研究ＥＪ］．微生物学通报，２００２，２９（４）：６５—６７．　Ｅ３－［王芳，马俪珍．鸡腿菇浸提液对乳酸菌生长的作用［Ｊ］．　山西农业大学学报（自然科学版），２００３，２３（４）：３４２—３４４．　［４］孟祥晨，李艾黎，霍贵成．嗜酸乳杆菌增菌培养基的优化　ＥＪ］．食品工业科技，２００２，２３（６）：２５—２７．　９．ｉ３２　９．３１７　６２　Ｉ．９９　９．２３２　９．４０２　０　１．８１　［５］梁敏山．乳酸菌增殖培养及直投式酸奶发酵剂的研究　９．２３０　９．４３４　４６　２．ｉ７　９．１２８　９．４４６　８５　３．３８　［Ｄ］．成都：西华大学，２０１０．　［６］黄君红，成洁珊，陈青荷．乳酸菌生长最佳培养基的筛选　ＥＪ］．中国酿造，２００１（２）：９－Ｉ１．　３结论　［７］康婕，吕嘉枥，刘洋．不同蔬菜对保加利亚乳杆菌生长　本研究以Ｌｏｇｉｓｔｉｃ方程为基础，建立了保加利　亚乳杆菌发酵复合蔬菜培养基过程中菌体生长动　力学模型．比较可知，所建模型与实验数据能够比　的影响［Ｊ］．食品工业科技，２０１３，３４（１１）：１５６—１５９．　［８］孟祥晨，王弧峰，霍贵成．青春双歧杆菌增菌培养基的优化　［Ｊ］．食品与发酵工业，２００２，２８（７）：１５—１９．　［９］李志成，张连斌，段旭昌，等．嗜酸乳杆菌生长促进物质研　较好的拟合，在一定程度上揭示了保加利亚乳杆菌　发酵复合蔬菜培养基的菌体动力学特征，可用来判　断发酵过程的优劣，制定发酵工艺参数，实现发酵　罐发酵的优化控制，为大规模的发酵提供理论依　据．而且在发酵过程中测定了ＳＯＤ酶和亚硝酸盐　含量的变化．结果表明，在发酵温度为３７℃，接种　量为３％，装料量为７Ｏ　的条件下，活菌数可达９．３　×ｌ０。ｃｆｕ／ｍＬ；ＳＯＤ酶的活力为１６９．３２　Ｕ／ｍＬ；亚　硝酸盐含量稳定在０．１２　ｍｇ／ｋｇ左右．　参考文献　［１］周小莉．乳酸菌在燕麦基质中生长特性研究［Ｄ］．无锡：江　南大学，２０１２．　究［Ｊ］．中国食品学报，２００６，６（５）：４０—４４．　［１ｏ］李平兰，国　辉，郑海涛．几种食品原料对双歧杆菌体外　促生长效果初探［Ｊ］．中国乳品工业，２００１，２９（６）：１４—１６．　［¨］韩雪，张兰威．双歧杆菌增殖因子的筛选及培养基的优　化［Ｊ］．食品与生物技术学报，２００５，２４（４）：６９—７２．　［１２］Ａｌｖｅｓ　Ｍ，Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ　Ｔ，Ｑｕｉｎｔａｓ　ｃ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｙｅａｓｔ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｄｙｎａｍｉｃｓ　ｉｎ　ｃｒａｃｋｅｄ　ｇｒｅｅｎ　ｔａｂｌｅ　ｏｌｉｖｅｓ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，２０１２，２３（２）：３６３—３６８．　［１３］马向前，周德庆．双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数　法［Ｊ］．微生物学报，１９９７，３７（１）：６２—６３．　［１４］ＧＢ／Ｔ　５００９．３３—２０１０，食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定　［ｓ］．　ｒ　１　５］Ｅｌｉｂｏｌ　Ｍ，Ｍａｖｉｔｕｎａ　Ｆ．Ａ　ｋｉｎｅｔｉｃ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　Ａ３（２）［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｓｔｒｙ，１９９９，３４（６）：６２５—６３１．　【责任编辑：蒋亚儒】　（上接第１２９页）　［１７］Ｒａｏ　Ｋ　Ｒ，Ｒａｇｈｕｎａｄｈ　Ａ，Ｍｅｋａｌａ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｇｌｙｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｓａｔｏｉｃ　ａｎｈｙｄｒｉｄｅ　ｗｉｔｈ　ａｍｉｎｅｓ：Ａ　ｒａｐｉｄ　Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ　ｍａｒｉｎｅ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｔｒａｉｎ　ｏｆ　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ　［Ｊ］．Ｊ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，２００９，７２（４）：６６６—６７０．　［１９］周琴，李宁，邢亚超，等．角果藜化学成分的分离与鉴　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　３－（ｕｎ）ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ　ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ一４（３Ｈ）一ｏｎｅｓ　ｌｅａｄｉｎｇ　ｔｏ　ｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅ　ａｎｄ　ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ［Ｊ］．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ，２０１４，５５（４３）：６　００４—６　００６．　定［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２０１３，３０（９）：６７４—６７６，６８２．　［２Ｏ］于洋，宋卫霞，郭庆兰，等．金银花水提取物的化学成分　［１８］Ｆｒｅｍｌｉｎ　Ｌ　Ｊ，Ｐｉｇｇｏｔｔ　Ａ　Ｍ，Ｌａｃｅｙ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｔｔｏｑｕｉｎａｚｏ—　ｌｉｎｅ　Ａ　ａｎｄ　ｃｏｔｔｅｓｌｏｓｉｎｓ　Ａ　ａｎｄ　Ｂ。ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ａｎ　研究［Ｊ］．中国中药杂志，２０１５，４０（１７）：３　４９６—３　５０４．　【责任编辑：蒋亚儒】