免疫异常表型对MDS诊断及分型诊断研究

发表时间：2010-12-23T10:59:24.557Z 来源：《中国美容医学》（综合）10年第4期供稿 作者： 王颖 张蕾 朱杰[导读] MDS的CD13、CD33抗原异常表达明显高于对照组，并且明显随着疾病恶化发展，其抗原表达逐渐增加。王颖 张蕾 朱杰(大连医科大学附属二院116023)

【摘要】目的:探讨免疫异常表型对骨髓增生异常综合征（Myelodysplastic Syndrome MDS）分型诊断及鉴别诊断价值。方法:选用多种单克隆抗体，用流式细胞测定分析仪，对390例MDS、50例良性血液病人（贫血、粒细胞减少症、血小板减少性紫癜、感染等）的骨髓细胞免疫表型进行测定分析研究；结果:MDS 89.3%以上有二系或三系免疫表型异常，其中CD7、CD19、CD13、CD14、CD33、CD34、HLA-DR免疫标志变化最大，明显高于正常对照组（P<0.01）；髓系抗原表达明显增高，而且随MDS进展恶化，FAB亚型抗原表达出现规律性变化，RA→RAS→RAEB→向RAEB-T转化，较早期髓系抗原表达（如CD13、CD33）逐渐增加，而较晚期髓系抗原表达（如CD15、CD24）逐渐减少；同时伴淋系抗原表达逐渐减少；骨髓干细胞/祖细胞表面抗原（如CD34HLA-DR），随着MDS恶化发展，有逐渐明显增加异常表现，而且CD34、HLA-DR早期抗原表达增高者，常常预后较差，易于转化成白血病。结论:骨髓细胞免疫异常表型，对MDS诊断、分型诊断及鉴别诊断，并对治疗、预后判断有重要指导价值。【关键词】骨髓增生异常综合征;免疫表型

【中图分类号】R733.72【文献标识码】B【文章编号】1008-6455（2010）10-0110-02

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组异质性很强的造血干细胞克隆性疾病。该病复杂，表现各异，目前尚无特异性诊断方法，国内外仍以FAB形态学分类为依据，但对一些不典型的MDS诊断非常困难，本文试图通过对MDS免疫表型的观察研究，探讨MDS发病机理，寻找特异性较高的诊断指标。 1材料方法

1.1临床资料:本组所有病人均来自我院1998年1月~2009年5月门诊、住院以及会诊病人390例，其中难治性贫血（RA）261例、难治性贫血伴铁幼粒细胞增多（RAS）24例、难治性贫血伴原始粒细胞增多（RAEB）78例、转化型原始细胞增多性难治性贫血（RAEB-T）27例。男218例，女172例，年龄13~88岁，>50岁有302例，占77.4%。上述MDS病人均按FAB分型诊断标准。对照组（16例缺铁性贫血、15例血小板减少性紫癜、9例感染、10例粒细胞减少症）。

1.2方法:初治取肝素抗凝骨髓混匀，300目滤网过滤；取过滤后骨髓液50ul，加入20ul相应单克隆抗体，混匀，室温避光20min；加入溶血素50ul，混匀，室温避光15min；加入蒸馏水0.5ml，混匀，室温避光10min；2000rpm离心5min，弃上清，加入生理盐水0.5ml，混匀；2000rpm离心5min，弃上清，加入0.5ml生理盐水，混匀，上机检测。采用美国BD公司提供的单克隆抗体，双标试剂为FITC-CD3/PF-CD4，FITC-CD3/PF-CD8，FITC-CD3/PF-CD16+56；单标试剂为FITC标记的CD7、CD13、CD14、CD15、CD5，PE标记的CD19、CD33、CD34、CD55、HLA-DR及Percp-CD45，库尔特公司提供的溶血素，生理盐水、蒸馏水自备，采用BD公司生产流式细胞仪

（FACSCalibur）分析测定，设门时，用Percp-CD45和SSC散点图进行分析，取日常工作中原始细胞团在散点图上出现的位置设门，然后进行其它结果分析，分析结果时，取髓系抗原>30%，淋系抗原及其它细胞>20%为阳性。

1.3统计学处理:用SPSS 12.0统计软件，进行统计分析，计量资料采用t值检验，计数资料采用X2检验，用来评估各组间发生率差异有否统计学意义。 2结果

详见表1。表1MDS患者骨髓细胞中抗原表达阳性率（%）

.

2.1MDS干细胞/祖细胞抗原表达异常：本组MDS病人，CD34+、HLA-DR+细胞分别为9.7%和24.1%，明显高于对照组2.1%、18󰀀7%，两组相比有明显差异（P<0.01）；MDS的各FAB亚型，CD34+、HLA-DR+细胞数，也有显著性，随着MDS的进展，即

RA→RAS→RAEB→向RAEB-T转化，CD34+、HLA-DR+细胞比例逐渐增高，分别为7.1%及20.8%；9.8%及30.1%；13.2%及32.3%；14.9%及37󰀀5%，各组相比均有统计学意义。并且CD34+、HLA-DR+细胞免疫表型异常表达的病例中有47例转变成白血病，占12.1%。各亚型随着治疗缓解而CD34+、HLA-DR+细胞比例下降。复发时，CD34+细胞又回升。

2.2髓系早期抗原表达异常。MDS的CD13、CD33抗原异常表达明显高于对照组，并且明显随着疾病恶化发展，其抗原表达逐渐增加。RA→RAS→RAEB→RAEB-T各组之间有显著差异，P<0.01。

2.3髓系成熟抗原表达异常：从表中可见CD15表达存在异质性，CD15成熟髓系抗原较对照组不同程度减低，分别占48.7%、44.1%、48󰀀4%、44.7%、42.1%、13.4%，并有随着MDS分型进展有逐渐减低趋势，尤以RAEB-T减低明显，仅13.4%，提示CD15抗原减少，是MDS病情进展一个预兆。

2.4单核细胞表面相关抗原表达异常：本组CD14较对照组明显增高，分别占14.2%、5.7%，各组之间随着MDS分型有逐渐增加趋势，可能与单核细胞系列性抗原表达紊乱、错位有关。

2.5淋系细胞抗原表达异常：本组T淋巴细胞CD3、CD4、CD7、CD8抗原表达除CD7明显低于对照组外，其它各种抗原表达与对照组相比，有11例（占22.5%）无显著差异，但在FAB各亚型中，抗原表达呈逐渐减低倾向，各型之间，除了CD3在RAEB及RAEB-T有明显差异外，其它各型间差异不显著，P>0.05；T淋巴亚群、CD4/CD8比值与对照组及各亚型之间，无明显差异，P>0.05。B淋巴抗原表达不但明显高于正常对照组，P<0.01,而且，随着MDS恶化，各型逐渐减低，相互之间有显著差异，P<0.01。

2.6免疫表型异常与预后关系：在MDS 390例中，有47例转化为急性粒细胞白血病，CD34+细胞抗原表达>6%，当CD34+细胞抗原表

达≥1%，中位生存率较短；相反CD34+细胞抗原表达<1%时，中位生存率较长。本组有3例MDS转化白血病，反复检测CD34+抗原表达分别为3.4%、5.6%、7.1%，原始细胞明显增多，有2例恶化死亡。因此，CD34+细胞抗原表达可监测MDS发展、预后、转归，并呈负相关。

2.7关于糖化磷脂酰肌酶锚链蛋白（GPI），即CD55、CD59抗原表达。本组MDS CD55+、CD59较正常组有不同程度减低，各型之间变化没有规律性，本组有81例RA型，测定CD55、CD59较正常明显减低，22例RA型分别为40.3%、37.2%，复查糖水试验Ham试验阳性，诊断MDS合并PNH，提示MDS、PNH均属多能干细胞异常克隆性疾病，相互间有一定关联。 3讨论

3.1MDS免疫表型研究意义：MDS是一类髓系肿瘤性疾病，表现为髓系病态造血及无效造血，高风险转化为急性白血病，是多发病、常见病[1、2]。各亚型的临床表现，自然病程及预后不同，表现复杂，目前仍以形态学诊断为主，对非典型病例诊断及鉴别诊断极为困难，本文有20.0~31.0%MDS-RA型病人，形态学不够典型，但病人骨髓细胞免疫表型确有明显异常表现。文献记载，在MDS RA型临床、周围血象、骨髓粒、红、环铁幼粒细胞、原始细胞数及细胞形态学改变等诸项诊断指标还未出现异常时，但髓系细胞异常免疫表型就出现了，结果表明，髓系的异常免疫表型反映MDS的异常更早、更敏感，因此Kristensen建议将免疫表型列为诊断MDS（特别RA）的重要诊断指标。比如，不明原因难治性贫血，或难治血小板减少，或难治性白细胞减少，当细胞学形态难以确诊时，应做骨髓细胞免疫表型检测，如CD34+细胞持续增高，CD34+≥1，或CD33+、CD13+明显增高，CD14+、CD15+逐渐减低，特别髓系免疫表型异常表达，对MDS诊断更有意义。原因是MDS主要病理改变在粒细胞系统，并且这种改变与细胞形态学有密切相关性，即病态造血严重，其髓系细胞免疫表型越异常，所以，通过深入研究，对探讨MDS发病机理有重要意义[3~5]。

3.2单核细胞特异性抗原表达特点：MDS骨髓粒、单核细胞免疫表型有明显异常，其表现在单核系列特异性抗原CD14及早期髓系抗原CD33、CD13表达增多，而晚期成熟粒细胞抗原CD15表达减少，提示单核细胞系列特异性抗原表达紊乱、错位，除CMML外，其它MDS骨髓形态（瑞氏）检查并无20~30%单核细胞，说明部分单核细胞抗原表达在其它系列上，使骨髓分化成熟障碍[1、2、6]。

3.3MDS髓系免疫表型对MDS鉴别诊断有重要价值：MDS髓系免疫表型异常是其它贫血，如AA、PNH髓系不具有的，本组24例难诊断病例通过髓系免疫表型CD34异常增高，CD13、CD13/CD15比值测定得到确诊。因此，AA、PNH病人临床形态学很难鉴别时，应当首先做髓系免疫表型，如CD13、CD14、CD15、CD33检测，有助于MDS确诊。提示AA、PNH不存在髓系细胞分化成熟异常，可除外恶性病。

3.4MDS免疫表型有助于病情进展、预后观察：MDS髓系免疫异常与病情进展预后有重要意义。比如低危组MDS（RA/RAS）发展到高危组MDS（RAEB、RAEB-T→急性粒细胞白血病），早期髓系抗原CD13+、CD33+细胞逐渐增加，成熟髓系抗原CD14+、CD15+细胞逐渐减少；当CD33或CD13/CD15>1.5，提示病情恶化，髓系细胞分化严重。CD33或CD13/CD15<1时，病情处于稳定。又如CD14、CD15、CD33表达平均值增高，提示治疗效果不佳，说明免疫表型与预后及治疗效果有一定相关性[1、2、3、7、8]。

本文凡是CD34免疫表型异常高表达者完全缓解率低，缓解所需疗程长，预后不佳，转白率高。又如CD4增高46例病人中，红系无效造血严重，有不同程度黄疸，血中网织红细胞增高，提示CD4的异常激活后，辅助B细胞产生抗体，是发生原位溶血重要原因。

3.5CD55、CD59免疫异常表达对MDS、AA、PNH、及其他全血细胞减少症有重要诊断价值：本文有27.2%的病人CD55、CD59呈不同程度的减低，文献报道，有15.5%的MDS表现为CD55、CD59免疫缺陷，提示MDS与AA、PNH同属多能干细胞异质性疾病，本文有3例可相互转化[2、3]。

3.6异常免疫表型与MDS病人髓系终末细胞功能关系，对判断预后、指导治疗都有其重要价值。我们发现有1/3MDS病例，骨髓未成熟粒系抗原表达增多，细胞成熟障碍，分化异常，细胞形态呈粒-单双重性，异常核分裂、异常核碎解、异常核碎片、超大核分裂，胞浆颗粒缺乏，ALP、POX阴性，核成熟障碍，细胞趋化、游走、粘附及吞噬功能较差，病态造血越严重，临床常出现严重致命感染现象，这种表现与髓系终末细胞系列特异性抗原丢失和错位有关[1、3、7、8]，提示粒-单两系共同前体细胞丢失了正常系列分化特征，进一步证明该病异常克隆源性。

总之，MDS免疫表型异常表达有助于正常人及其它贫血患者，且与MDS病情发展及预后转归密切相关，特别检测MDS髓系免疫抗原，不仅有助于MDS早期诊断和鉴别诊断，并且对探讨MDS发病机制有重要意义。 参考文献

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