人参五味子冲剂质量标准研究

．１６．　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１５、，０１．（７）　Ｎｏ．４　人参五味子冲剂质量标准研究　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄｓ　ｏｆ　Ｒｅｎｓｈｅｎ　Ｗｕｗｅｉｚｉ　ｅｌｅｃｔｕａｒｙ　郭　强　（河南省食品药品检验所，河南　郑州，４５０００３）　中图分类号：１１２８４　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７４．７８６０（２０１５）４－００１６．０３　【摘要】目的：建立人参五味子冲剂质量标准。方法：采用薄层鉴别方法进行定性鉴别，运用高效液相色谱法测定五味子　醇甲的含量。结果：确立了制剂中五味子的鉴别方法。通过方法学系统考察，建立了五味子醇甲的含量测定方法，其五味子醇甲　的线性范围为０．０９３９￣１．５０２２ｇｇ，回归方程Ｙ＝６１６５０６２ｘ一６３７９６（ｒ＝０．９９９），平均加样回收率９９．２％，ＲＳＤ１．０３％（ｎ＝６　ｏ结论：　建立的鉴别和含量测定方法简便、准确、重复性好，适用于质量控制。　【关键词１人参五味子冲剂；五味子；五味子醇甲；高效液相色谱　［Ａｂａｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄｓ　ｆｏｒ　Ｒｅｎｓｈｅｎ　Ｗｕｗｅｉｚｉ　ｅｌｅｃｔｕａｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｔｈｉｎ　ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　（ＴＬＣ）ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ；ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｓｃｈｉｓａｎｄｒｉｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｓｃｈｉｓａｎｄｒｉｎ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｓｃｈｉｓａｎｄｒｉｎ　ｗａｓ　ｌｉｎｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０９３９—１．５０２２ｇｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｗａｓ　Ｙ＝６１６５Ｏ６２ｘ一６３７９６　ｒｒ＝０．９９９）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９９－２％ａｎｄ　ＲＳＤ　ｗａｓ　１．０３％（ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｏｒｆ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏ１．　［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｒｅｎｓｈｅｎ　Ｗｕｗｅｉｚｉ　ｅｌｅｃｔｕａｒｙ；Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；Ｓｃｈｉｓａｎｄｒｉｎ；ＨＰＬＣ　ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４－７８６０．２０１５．４．００５　人参五味子冲剂收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂　照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱　法（附录Ｉｖ　Ｂ）试验，吸取上述三种溶液各２１ａＬ，分别点于同　一第四册，由五味子和生晒参２味中药组成，用于病后体虚，神　经衰弱等症［１】。具有益气敛阴、安神镇静之功效。原质量标准　只收载了一个理化反应、生晒参的薄层色谱鉴别，并无五味子　的薄层鉴别和主要成分的含量测定。为了有效地控制该制剂的　质量，本文采用ＴＬＣ法对五味子进行了鉴别，采用ＨＰＬＣ法　测定五味子中五味子醇甲的含量，作为控制本制剂内在质量的　指标。　硅胶ＧＦ２　４薄层板上，以石油醚（３０￣６０℃）一甲酸乙酯一　甲酸（１５：５：１）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，　置紫外光灯（２５４ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照药材　色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对　照无干扰。　２．２五味子醇甲的含量测定【２１　１材料　２．２．１供试品溶液的制备　取本品适量，研细，过三号筛，取约５ｇ，精密称定，置　５０ｍＬ量瓶中，加甲醇约３０ｍＬ，超声处理（功率２５０Ｗ，频率　２０ｋＨｚ）２０ｒａｉｎ，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取　续滤液，即得。　２．２．２对照品溶液的制备　精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每ｌｍＬ含　五味子醇甲０．０３ｍｇ的溶液，即得。　２．２－３阴性对照品溶液的制备　按处方取不含五味子的其他药材，照本制剂的制备工艺　制成阴性对照制剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对　照溶液。　Ｗａｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪（配四元泵、自动进样器、　Ｗａｔｅｒｓ２４８７紫外检测器）；安捷伦１１００高效液相色谱仪（配四　元泵、自动进样器、ＶＷＤ紫外检测器）；人参五味子冲剂（企　业提供）；五味子对照药材（批号：１２０９２２　２００６０６，供鉴别用）；　五味子甲素（批号：１１０７６４．２００４０８，供含量测定用）；五味子　醇甲（批号：１１０８５７—２００６０８，供含量测定用），甲醇为德国　Ｍｅｒｃｋ公司色谱醇，水为超纯水，其余溶剂均为分析纯。　２方法与结果　２．１薄层色谱鉴别　２．１．１五昧子的鉴别【　］　取本品１５ｇ，研细，加入三氯甲烷２０ｍＬ，加热回流３０ｍｉｎ，　滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷ｌｍＬ使溶解，作为供试品　溶液。另取五味子对照药材１ｇ，同法制成对照药材溶液。再取　五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ｌｍＬ含ｌｍｇ的溶液，　作为对照品溶液。按其处方比例制备不含五味子的阴性样品，　２．２．４色谱条件　用十八烷基硅烷基键合硅胶为填充剂；甲醇一水（７０：３０）　为流动相，检测波长为２５０ｎｍ，流速１．０ｍＬ・ｍｉｎ～，柱温３Ｏ℃，　进样量１０　，理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于２０００。　２．２．５阴性干扰试验　分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各　ＣＪＣＭ中医临床研究２０１５年第７卷第４期　１ＯｌＬ，注入液相色谱仪。结果表明，供试品色谱中在与对照品　色谱相应位置上有色谱峰，而阴性对照色谱中在与对照品色谱　．１７．　相应位置上则未出现明显色谱峰，表明在该ＨＰＬＣ测定条件下，　五味子醇甲的测定无明显干扰。见图１。　２Ｏ０　４ｏｏ　６Ｏ０　８Ｏ０　１Ｏ　ｏ０　１２　００　７７　１４　００　１６　Ｄ口　１日００　２０　００　２２　０ｏ　２４　０ｏ　Ａ　Ｂ　Ｃ　Ａ．对照品；Ｂ．供试品；Ｃ朋性；１．五味子醇甲。　图１人参五味子冲剂样品ＨＰＬＣ　２．２．６线性关系考察　精密取五味子醇甲对照品，分别制成浓度为９．３９￣ｔｇ／ｍＬ、　３７．５６￣ｍＬ、７５．１１　ｍＬ、１１２．６６ｐ．ｇ／ｍＬ、１５０．２２￣ｔｇ／ｍＬ的样品，　味子醇甲峰面积，结果表明本品在１０ｈ内稳定，ＲＳＤ１．２％。　２．２．９重复性试验　取同一批号（批号：１２０３０４）样品６份，按供试品溶液制　进样量ｌＯｌＬ，测定峰面积，将进样量与峰面积进行线性回归　处理，方程为Ｙ＝６１６５０６２Ｘ－－６３７９６（ｒ＝０．９９９），五味子醇甲　在０．０９３９￣１．５０２２Ｄｇ之间呈良好的线性关系。　２．２．７精密度　备方法制备６份供试液，分别测定五味子醇甲含量，结果含量　平均值为０．３０ｍｇ・ｇ～，ＲＳＤ１．８％，表明样品的重复性良好。　２．２．１０加样回收率试验　取本品己知含量的样品（批号：１２０３０４，五味子醇甲含量：　精密吸取同一对照品溶液１０ｕＬ，重复进样５次，测定峰　面积积分值，结果ＲＳＤ０．６５％，表明精密度良好。　２．２．８稳定性试验　０．３０ｍｇ・　）６份，约２．５　份，置５０ｍＬ量瓶中，精密加入对照　品溶液（浓度：０．０３０７５ｍｇ・ｍＬ　，配制方法：精密量取五味子醇　甲对照品６．１５ｍｇ，加入甲醇溶解并定容至２００ｍＬ）２５ｍＬ，按上　述供试品溶液制备方法制备样品溶液，按上述含量测定方法进行　精密吸取本品供试品溶液（批号：１２０３０４）１１３ｌｕＬ，分别在　０ｈ，２ｈ，４ｈ，６ｈ，８ｈ，１０ｈ时间内注入液相色谱仪中，测定五　表１五味子醇甲回收率测定（　＝６）　测定，结果见表１，平均回收率为９９．２％，ＲＳＤ１．０３％。　－１８一　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａ１　ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１５　ｖｏｌ＿（７）　Ｎｏ．４　３讨论　参考文献：　［１］中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准中　３．１薄层鉴别方法选定过程【　］　薄层色谱研究中，最初取样量为５ｇ，结果供试品色谱相应　的位置上，斑点微弱不易见，考虑是取样量少，结合药典五味　子项下鉴别取样量，最后确定取样量为１５ｇ，在此条件下，斑　药成方制剂（第四册）［Ｓ］．北京，１９９１：５　［２］国家药典委员会中华人民共和国药典（一部）［ｓ］．北京：中国医药科技出版　社，２０１０：６１　点清晰可见。　３．２含量测定提取方法选择［　］　含量测定中，对供试液提取溶剂选用了甲醇、乙醇、稀乙　作者简介：　郭强（１９８３一），通讯作者，男，河南郑州人，硕士，河南省食品药品　检验所主管药师，研究方向：药品检验、药品质量标准研究及药品检测技　术研究。　醇，结果甲醇提取的五味子醇甲含量最高，且药典五味子项下　也是用甲醇提取，故选定甲醇作为提取溶剂。提取方法比较了　超声提取和回流提取，结果同样时间条件下，两者所得含量几　乎相同。参照药典五味子项下方法，最终确定取样为５ｇ，加入　甲醇５０ｍＬ，超声２０ｍｉｎ作为本品的提取方法。　编辑：段苏婷编号：ＥＡ一１４０５３０３０５（修回：２０ｌ５—０２—０４）　（上接１５页）　照试验证实。另外纳入的所有研究均无患者报告结局，即患者　床研究［Ｊ］．航空航天医学杂志，２０１３，２４（４）：４７９．４８０　［１Ｏ］张磊，王璐，刘拥军．凉血汤治疗白疙血热证临床疗效观察［Ｊ］ｌ吉林中医　药，２０１３．３３（３）：２６９—２７０　对自身健康的感受，如生理心理状态和对治疗的满意程度等。　在未来的研究中应注重运用生存质量量表等来反应患者报告　结局，从而有助于全面显示中西医结合在寻常型银屑病治疗中　［Ｉ１］刘运梅，张连爱，张秋花．清热凉血润燥化瘀法治疗寻常型银屑病疗效观　察［Ｊ］＿内蒙古中医药，２０１１，３０（９）：４０－４１　［１２］徐明．清热凉血汤治疗寻常型银屑病血热证Ｉ临床疗效观察【Ｊ］．辽宁中医　药大学学报，２０１３，１５（１）：１７７．１７８　的疗效优势。　参考文献：　［１］Ｍａｌｄｏｎａｄｏ　Ｆｉｃｃｏ　Ｈ，Ｃｉｔｅｒａ　Ｇ　Ｍａｌｄｏｎａｄｏ　Ｃｏｃｃｏ　ＪＡ．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆｐｓｏｒｉａｔｉｃ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｉｎ　ｐｓｏｒｉａｓｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｎｅｗｅｒ　ｃｌａｓｓｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｃｒｉｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，２０１４　Ｆｅｂ，３３（２）：２４３・２４６　［１３］陈士连窦金娟，张志忠－５可维Ａ联合消银汤治疗寻常性银屑病的疗效分析［Ｊ］．　中国实用医药，２０１３，８（１４）：１６９．１７０　［１４］韩秀琴，于海燕．自拟凉血解毒养阴汤加减治疗寻常型银屑病６６例疗效观　察［Ｊ］＿中医药导报，２０１２，１８（１０）：５３．５４　［２］丁晓岚，王婷琳，沈佚葳，等．中国六省市银屑病流行病学调查［Ｊ］．中国皮肤　性病学杂志．２０１０，２４（７）：５９８．６０１　［１５］王俊山，刘凤全．中药结合迪银片治疗银屑病疗效观察［Ｊ］．黑龙江医　学，２００２，２６（８）：５９４．５９５　［３］张际文，王洁贞，张华，等．中草药治疗寻常型银屑病随机对照试验的循证评　价［Ｊ］ｌ中国麻风皮肤病杂志，２００３，１９（４）：３７０—３７２　［４］Ｌｅｖｉｎ　ＡＡ，Ｇｏｔｔｌｉｅｂ　ＡＢ，Ａｕ　ＳＣ　Ａ　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ　Ｄｒｕｇ　Ｆａｉｌｕｒｅ　Ｒａｔｅｓ　ａｎｄ　Ｒｅａｓｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ　ｖｓ　Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｓｔｅｍｉｃ　［１６］张晓宁．消银胶囊治疗寻常型银屑病７６ｆｆＪｌ【Ｊ］．陕西中医学院学报，２０１３，　３６（６）：６９－７０　［１７］韦珠荣．中西医结合治疗寻常型银屑病６０例近期疗效临床研究［Ｊ］ｌ航空航　天医学杂志，２０１３，２４（２）：１５３—１５４　Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｊ　Ｄｒｕｇｓ　Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２０１４　Ｊｕｌ　１，１３（７）：８４８－８５３　［５］才吉甫，向红芬，马凌蓉，等．自拟紫丹消银汤治疗寻常型银屑病５２例＿Ｊ＿．中　国中医药科技，２０１３，２０（６）：６８３．６８４　［６］钟卫红，莫惠芳，储开宇，等．和银饮治疗寻常型银屑病３５例疗效观察［Ｊ］．皮　肤性病诊疗学杂志　２０１３，３０（４）：４８８－４９４　［７］郭建辉，郭雯，李怀芝，等从络病论治寻常型银屑病３０例临床观察［Ｊ］．中医　药导报　２０１２．１８（１１１：４０．４１　作者简介：　周国容，女，大连市金州区中医院副主任中医师，主要研究方向：中　医临床。　［８］林少健凉血疏肝方对寻常型银屑病患者神经肽影响的研究［Ｊ］．新中　医．２０１２．４４（１２）：８２．８４　［９］孟凡萍，张敏．头孢曲松钠与卡介菌多糖核酸联合治疗寻常型银屑病的临　编辑：段苏婷编号：ＥＡ一１４１１１７１７２（修回：２０１５－０２．０８）