2005年药大生物化学试题详解

2005年药大生物化学试题详解

2005年生物化学试题
一、单项选择题

1、（3）NAD2H氧化呼吸链一次产生3分子

ATP
2、(2)丝氨酸属于极性不带电荷氨基酸
3、（4）酶纯化后总蛋白量降低，比活度升高
4、（3）还原程度最高的细胞色素是细胞色素b
5、（2）同工酶催化的反映一定相同
6、(3)磷酸丙糖异构酶不是调节酶6、（3）磷酸丙糖激酶是酶酵解重要的异构酶

代谢途径变构酶激活变构剂抑制变构剂

糖氧化分解已糖激酶 G-6-P
磷酸果糖激酶AMP、ADP、FDP、PiATP、柠檬酸 丙酮酸激酶

FDPATP、乙酸CoA

柠檬酸合成酶ADP、

胰蛋白酶切的是Arg和Lys羧基侧的肽键。所以作用部位是Arg-Pro和Lys-Try
其他的酶同理。

溴化氰是打断Met羧基侧的肽键
1.胰蛋白酶属肽链内切酶，能把多肽链中Lys和Arg残基中的羧基侧切断。

2.胰凝乳蛋白酶（亦称糜蛋白酶）属肽链内切酶，主要切断多肽链中的芳香族氨基酸（Phe、Trp、Tyr）残基的羧基一侧。

3.羧肽酶（分A和B型），一般的题目中没有特别指明的话就是两种类型的功能都具备，可以从羧基端切除氨基酸（若羧基端的第1个或第2个氨基酸为Pro的则不能切除）。

4.溴化氰处理，专一性的切割甲硫氨酸羧基端的肽键。

胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)为蛋白酶的一种，EC3.4.21.4。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是作为酶的前体胰蛋白酶原而被合成的。作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。

9、（3）转氨酶的辅酶来自维生素B6
10、（4）防止血栓生成可采用尿激酶抗血栓药主要包括抗血小板药、抗凝药和溶栓药(纤维蛋白溶解药)三类。前两类主要用于预防血栓形成，

后一类主要用于急性心肌梗死、脑梗死后，溶解已形成的血栓。

常用的抗血小板药有阿司匹林、氯吡格雷(波立维、泰嘉)、西洛他唑(培达)。常用的抗凝药主要有肝素、低分子肝素和华法林。维生素K，萘醌类，脂溶性。由HenrikDam在1929年发现。是一系列萘醌的衍生物的统称，主要有天然的来自植物的维生素K1、来自动物的维生素K2以及人工合成的维生素K3和维生素K4。又被称为凝血维生素。多存在于菠菜、苜蓿、白菜、肝脏。硫酸链霉素为一种氨基糖苷类抗生素。链霉素对结核

分枝杆菌有强大抗菌作用，其最低抑菌浓度一般为0.5mg/ml。非结核分枝杆菌对本品大多耐药。

尿激酶为从健康人尿中分离的，或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋

白。由分子量分别为33000（LMW-tcu-PA）和54000（HMW-tcu-PA）两部分组成。本品直接作用于内源性纤维蛋白溶解系统，能催化裂解纤溶酶

原成纤溶酶，后者不仅能降解纤维蛋白凝块，亦能降解血循环中的纤维蛋

白原、凝血因子Ⅴ和凝血因子Ⅷ等，从而发挥溶栓作用。本品对新形成的

血栓起效快、效果好。本品还能提高血管ADP酶活性，抑制ADP诱导的血小板聚集，预防血栓形成。本品在静脉滴注后，患者体内纤溶酶活性明显

提高；停药几小时后，纤溶酶活性恢复原水平。

α-抗胰蛋白酶(AAT），是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋

白一般认为AAT的主要功能是对抗由多形核白细胞吞噬作用时释放的溶酶体蛋白水解酶。由于AAT的分子量较小，它可透过毛细血管进入组织液与蛋白水解酶结合而又回到血管内，AAT结合的蛋白酶复合物并有可能转移到α2-巨球蛋白分子上，经血循环转运而在单核吞噬细胞系统中被

降低、消失。

11、（1）尿素循环中不存在谷氨酸
12、（2）细胞经紫外线照射后置于可见光下复活率最高
紫外线能够导致嘧啶二聚体产生从而破坏DNA，而可见光可以激活光复活酶分解这些二聚体。

一般就指微生物的光复活，多细胞生物甚至鸟类也具有光复活酶，而

高等哺乳类是没有的。

13、（3）异戊巴比妥将导致呼吸链受抑制常见的电子传递抑制剂（呼

吸链阻断剂）有鱼藤酮、粉蝶霉素A、异戊巴比妥等
血药肝素和双香豆素在体内体外的抗凝血作用,
抑制剂又称为缓聚剂。阻滞或降低化学反应速度的物质，作用与负催

化剂相同。它不能停止聚合反应，只是减缓聚合反应。借以抑制或缓和化

学反应的物质。种类很多，应用很广。

氧化磷酸化的解偶联剂和抑制剂

⒈电子传递抑制剂

能够阻断呼吸链中某一部位电子传递的物质称电子传递抑制剂。a)鱼藤酮（rotenone）
作用：阻断电子由NADH向CoQ的传递。

b)抗霉素A(antimycinA)
作用：抑制电子从细胞色素b到细胞色素C1传递的作用。

c)氰化物、叠氮化物、一氧化碳
作用：有阻断电子由Cytaa3传至氧的作用。

定义：不抑制呼吸链的组分，也不抑制ATP合酶复合体，但它破坏两者的关系。逐渐消除内、外的质子浓度差。促进电子传递但不生成ATP。⒊氧

化磷酸化抑制剂(inhibitors)
抑制F0F1－ATP合成酶，不断地使H＋由内向外，但质子泵最终泵不动了。如寡霉素⒋离子载体抑制剂(ionophores)
通过增加mt内膜对一价阳离子的通透性而破坏氧化磷酸过程。如缬氨霉素（valinomycin）
短杆菌肽(gramicidin)
酶的抑制剂

1、不可逆抑制彻底破坏了酶的结构和功能
2、可逆抑制
1）竞争性抑制抑制物与底物结构类似而引起的抑制。

2）非竞争性抑制抑制物与底物分别结和在酶的不同位点，通过引起酶失活而起到抑制

3）反竞争性抑制抑制物与酶和底物的复合物结合而起到抑制。

14、（4）80%
回收率=固定化酶活力/用于固定化的游离酶的活力*100%15、（2）限制性内切酶

在DNA上以限制性内切酶的酶切位点作为标记所绘制的物理图谱就是限制性内切酶图谱

限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease）:识别并切割特异的双链

DNA序列的一种内切核酸酶。

限制性内切酶能分裂DNA分子在一限定数目的专一部位上。它能识别外源DNA并将其降解。

DNA连接酶：催化双链DNA或RNA中并列的5′-磷酸和3′-羟基之间形成磷酸二酯键的酶。

核酸外切酶（exonuclease）在核酸水解酶中，是具有从分子链的末端顺次水解磷酸二酯键而生成单核苷酸作用的酶，与核酸内切酶相对应。可大致分为水解磷酸二酯键的3′端生成5′-单核苷酸的酶，及水解5′端生成3′-单核苷酸的酶。

DNA聚合酶（DNApolymerase）是胞复制的重要作用酶。DNA聚合酶,以DNA为复制模板，从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。

二、名词解释
1、非竞争性抑制剂：抑制剂与酶分子在底物结合位点以外的部位结合，不影响酶与底物的结合。因此，只影响酶催化反应的最大反应速度，不影响米氏常数，非竞争性抑制反应的双倒数图表现为在不同抑制剂浓度下，所有直线交横轴于一点。

竞争性抑制：一种最常见的酶活性的抑制作用，抑制剂与底物竞争，从而阻止底物与酶的结合。其动力学特点是：酶促反应的表观米氏常数增大、最大速度不变。可以通过增加底物浓度来解除这种抑制。

反竞争性抑制：对酶活性的一种抑制作用，由于所加入的抑制剂能与

酶-底物复合物结合，而不与游离酶结合，所以其特征是反应的最大速度比未加抑制剂时反应的最大速度低，当以速度的倒数相对底物浓度的倒数作图，所得图线与未被抑制反应的图线平行。

2、离子交换色谱：离子交换色谱中的是一些带电荷的基团，这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。如果流动相中存在其他带相反电荷的离子，按照质量作用定律，这些离子将与结合在固定相上的反离子进行交换。

3、核酸的变性：核酸在理、化因素作用下，双螺旋结构破坏称核酸变性。

4、二维电泳：蛋白质二维电泳实验是利用蛋白质的等电点和分子量将样品中总蛋白分开。

5、底物水平磷酸化：含有高能键的物质，其高能键断裂后，释放高 被称为底物水平磷酸化作用能磷酸基团，使ADP磷酸化生成ATP的过程，
6、酶的活性部位：酶分子中能同底物结合并起催化反应的空间部位，由结合部位和催化部位所组成
7、RNA剪接：从DNA模板链转录出的最初转录产物中除去内含子，并将外显子连接起来形成一个连续的RNA分子的过程。

8、限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的 但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞侵入并使之失去活力，
原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶

9、干细胞工程：干细胞生物工程是利用干细胞在一定条件下进行分化，形成任何类型的组织和器官，实现组织器官等的无排斥移植，干细胞及其相关产品的研发和产品中试工艺流程的设计；干细胞及其相关产品应用基础和临床前动物实验；干细胞及其相关产品的临床试验和新的临床移植技术研究等工作的工程。

干细胞（StemCells）是一类未分化的细胞或原始细胞，是具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定的条件下，干细胞可以分化成机体内的多功能细胞，形成任何类型的组织和器官，以实现机体内部建构和自我康复能力。现将干细胞生物工程研究进展情况，作简要介绍：
10、抗代谢物：在微生物生长过程中常常需要一些生长因子才能正常生长，可以利用生长因子的结构类似物干扰集体的正常代谢，以达到抑制微生物生长的目的。此类生长因子的结构类似物又称为抗代谢物。

11、联合脱氨作用：转氨基与谷氨酸氧化脱氨或是嘌呤核苷酸循环，以满足机体排泄含氮废物的需求。

12、必需脂肪酸：维持哺乳动物正常生长所必需的，而动物又不能合成的脂肪酸，如亚油酸，亚麻酸。

一、问答题
1、什么是蛋白质的二级结构，主要包括哪几种，各有什么结构特征？2、比较哺乳动物脂肪酸β氧化和合成的主要区别。

3、称取25mg蛋白酶粉配制成25毫升酶溶液，从中取出0.1毫升酶 用Folin-酚比色法测定酶活力，得知每小时产生15000液，以酪蛋白为底物，
微克酪氨酸。另取2毫升酶液；用凯式定氮法测得蛋白氮为0.2毫克。若

以每分钟产生1微克酪氨酸的酶量为1个活力单位计算。根据以上数据求：

（a）1毫升酶液中所含蛋白质量为1个活力单位计算。根据以上数据求：（a）毫升酶液中所含蛋白质量及活力单位。（b）比活力（3）1克酶制剂的总蛋白含量及总活力。

4、已发现人体内有一种含量极微的蛋白质，对某一种疾病有很好的治疗作用，请你设计一套方案将其开发成药物，请写出具体步骤。

答：

1、首先根据该所产生的蛋白进行分析，测得其N端和C端的氨基酸序列，查找文献或根据细胞内部DNA序列来判断并找出该基因序列。 2、通过该基因序列构建模板，并交与专业的生物技术公司进行引物合成。

3、对引物进行PCR，得到大量该片段。

4、选择工程菌载体（一般多为原核生物）例如：大肠杆菌、酵母菌等等，将该基因片片段与感受态细胞混合，使基因进入载体从而形成工程

菌。

5、对工程菌进行培养并通过蓝白筛选等筛选方法将阳性菌株选出，进行再培养。

6、将此工程菌进行测序，并在摇瓶发酵后进行活性测定。

7、如果工程菌表达量过低，则需要查找文献，对基因片段中的个别位点进行定向突变，突变后同样通过设计引物来得到新的工程菌株。

8、当按上述方法找到表达量较高的工程菌的情况下，开始对发酵所用的培养基进行摸索，优化发酵条件提高工程菌的表达量以便于工业化生

产（动物细胞培养基要经过驯化，使其培养基血清含量降为0后方可进行工业化生产）。

下游部分：
1根据细胞的表达方法（胞内表达或胞外分泌），进行适当处理使其得到液状无颗粒杂质但含有大量杂蛋白的发酵原液。（胞内：破壁后离心或选用溶菌酶再离心胞外：可直接进行过滤分离）
2对该发酵原液液进行探索，根据其目的蛋白带电性与杂蛋白带电性的差异，选用阴离子交换法、阳离子交换法使目的蛋白得到初步。（二者可选其一，也可联合应用），收集每一个蛋白峰，并对其逐一进行测活，选出目的蛋白所在的主峰。

3对目的蛋白分子量进行分析，选用合适的凝胶分子筛填料对先前主峰中不同分子量的蛋白进行分离，在双波长或三波长UV检测下将所有蛋白峰进行收集并测活性。从而确认主峰。（多次测定后，可得到此蛋白峰的基本规律）
3由于此蛋白液中很有可能含有目的蛋白的异构体或其他未分离蛋白（如动物细胞培养基中的血清，所以要在驯化时便将其制止从而为纯化工艺带来方便），因此要对于此蛋白峰回收液再次进行分析。

4查找适当的亲和填料，使目的蛋白吸附或将目的蛋白穿透。

5经过上述方法一般可以获得较为纯净的目的蛋白，但如果是工业化生产还需要将此蛋白液通过具有热源类似底物性质的亲和填料，从而吸附热源，用于注射制剂和注射用冻干粉针制剂。

该类物质在分析时可应用疏水和正相色谱。但是下游纯化工艺中最好

还是不要引入其他有机物为好。

________________________________________________________________

______________________________________________________________

————By 一切随缘