补肾益精颗粒提取工艺的研究

维普资讯 http://www.cqvip.com 时珍国医国药２００７年第１８卷第１０期３讨论　ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００７　ＶＯＬ．１８　ＮＯ．１０　本文以乙醇为溶媒，以齐墩果酸含量为指标，通过正交设计　通过比较浸渍法、加热回流法、超声法３种提取方式，以超声　实验方法研究超声提取法提取夏枯草的工艺条件，并对影响提取　法提取所得齐墩果酸含量最高，故选用超声法作为夏枯草的提取　较大的乙醇浓度、乙醇用量、超声时间等因素进行考查，筛选出最　方法。　佳的提取工艺条件为乙醇浓度９０％，用量２０倍，时间４０ｍｉｎ。　表３正交实验结果　表４方差分析　ｌ（２．２）＝９．００，Ｆｏ　ｏ５（２２）＝１９．０，ｔｏｏｌ（２，２）＝９９．０　，．本提取工艺方法简便，节省时间，提取率高，为夏枯草的生产　和应用提供了参考依据。　参考文献：　［１］郑汉臣，蔡少青．药用植物学与生药学［Ｍ］．北京：人民卫生出版　社，２００４：３８９．　［２］　国家药典委员会．中国药典，Ｉ部［ｓ］．北京：化学工业出版社，　２００５：１９７．　［３］孙维广，廖慧丽，叶志明，等．夏枯草化学及药理研究概况［Ｊ］．中国　中医药信息杂志，２００３，１０（８）：８６．　补肾益精颗粒提取工艺的研究　吴月国　，张萍　，孙洁胤　，马丽萍　，刘　骅ｈ　３１００１３；２．上海交通大学药学院，上海２００２４０）　（１．浙江省医学科学院药物所，浙江杭州摘要：目的优化补肾益精颗粒的提取制备工艺。方法以淫羊藿苷的含量为指标，通过渗漉实验和正交设计回流实验　筛选最佳提取条件。结果渗漉提取的最佳工艺为用７０％乙醇作溶荆，浸渍４８　ｈ后，以１～３　ｍｌ／ｒｎｉｎ的速度缓缓渗漉。　正交设计实验最佳回流工艺为：用８倍量５０％乙醇，提取１次３　ｈ。结论正交设计回流实验优选得到的淫羊藿乙醇回流　法的提取工艺条件稳定可行。　关键词：补肾益精颗粒；　淫羊藿苷；渗漉法；　正交实验　中图分类号：Ｒ２８４．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－０８０５（２００７）１０－２５０６－０２　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　Ｂｕｓｈｅｎｙｉｊｉｎｇ　Ｇｒａｎｕｌｅｓ　ｂｙ　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　Ｔｅｓｔ　ＷＵ　Ｙｕｅ—ｇｕｏ　，ＺＨＡＮＧ　Ｐｉｎｇ　，ＳＵＮ　Ｊｉｅ—ｙｉｎｇ　，ＭＡ　Ｌｉ—ｐｉｎｇ　，ＬＩＵ　Ｈｕａ　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＭａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｆＭｅｄｉｏｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００１３，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｊｉａｏｔｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２４０，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　Ｂｕｓｈｅｎｙｉｊｉｎｇ　Ｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｉｃａｒｉｉｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｉｎ—　ｓｐｅｃｔｉｏｎ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ，ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｗｅｒｅ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｆｏｒ　ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　Ｂｕｓｈｅｎｙｉｊｉｎｇ　Ｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ￣ｃｔｏｒｓ（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｃａｏｈｏｌ（Ａ），ａｌｃｏｈｏｌ　ｖｏｌｕｍｅ（Ｂ），ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｔｉｍｅ（Ｃ）ａｎｄ　ｔｉｍｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ（Ｄ））ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　Ｗａｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍａｔｅｒｉｌ　Ｗａａｓ　ｐｅｒｃｏｌａｔｅｄ　ａｔ　１　ｔｏ　３　ｍｌ／ｍｉｎ　ａｆｔｅｒ　ｓｏａｋｅｄ　ｆｏｒ　４８　ｈｏｕｒｓ　ｉｎ　７０％ａｌｃｏｈｏ１．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｗａｓ　Ａ２　Ｄｌ　Ｃ３　Ｂ２，ｉ．ｅ．ｔｈｅ　５０％ａｌｃｏｈｏｌ　ｖｏｌｕｍｅ　ｂｅｉｎｇ　８　ｔｉｍｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｅｉ　ｇｈｔ　ｏｆ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍａｔｅｒｉｌ，ｅｘｔａｒａｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　１　ｔｉｍｅｓ　ａｎｄ　３　ｈｏｕｒｓ　ｅａｃｈ　ｔｉｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　Ｂｕｓｈｅｎｙｉｊｉｎｇ　Ｇｒｎｕｌａｅｓ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｉｓ　ａ　ｓｉｍｐｌｅ，ｑｕｉｃｋ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｍｅｔｈｏｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｂｕｓｈｅｎｙｉｊｉｎｇ　Ｇｒｎｕｌａｅｓ；　Ｉｃａｒｉｉｎ；Ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ；　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　补肾益精颗粒全方由淫羊藿、蛇床子、当归、川芎、小茴香、五　味子、补骨脂等７味药材组成，具有补肾壮阳，活血填精等功效。　本实验中我们按照中药新药研制的要求，在依据处方的中医药理　收稿日期：２００７－０１一ｌ１；修订日期：２００７－０３一ｌ１　论和分析处方中各味药之间的关系并结合剂型制备需要的基础　作者简介：吴月国（１９８１一），男（汉族），浙江长兴人，现任浙江省医学科学　上，分别采用渗漉法和正交设计回流实验，以淫羊藿苷收率为指　院药物所研究实习员，学士学位，主要从事中药和保健食品的成分分析与　标，对补肾益精颗粒的提取工艺进行了优化。　新产品开发工作．　１器材　’通讯作者简介：刘骅（１９６４一），男（汉族），浙江杭州人，现任浙江省医　１．１材料和试剂淫羊藿、蛇床子、当归、川芎、小茴香、五味子、　学科学院副研究员，学士学位，主要从事中药和保健食品的成分分析与新　补骨脂等药材均购自浙江华东医药股份有限公司药材参茸分公　产品开发以及药用植物的组织培养等研究工作．　司，并经由刘骅副研究员鉴定。淫羊藿苷对照品（批号０７３７—　・２５０６・　维普资讯 http://www.cqvip.com ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００７　ＶＯＬ．１８　ＮＯ．１０　时珍国医国药２００７年第１８卷第１０期　４验证实验根据筛选得到的最佳工艺提取５批样品，１８４．４　２００１１１）购于中国药品生物制品检定所。其余试剂均为国产分　２．ｇ药材中淫羊藿苷含量的平均值为１０３．１６　ｍｇ。此结果表明，采　析纯。　　１．２仪器Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ科技公　用最佳提取工艺提取补肾益精颗粒中的淫羊藿苷提取率较高。司），旋转蒸发仪（Ｒｅ一５２ＡＡ，上海亚荣生化仪器厂）。　２方法和结果　表２回流法正交实验　２．１　淫羊着苷含量测定方法　２．１．１　色谱条件淫羊藿苷的含量采用高效液相色谱法测　定”ｌ２　Ｊ。色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ　ＺＯＲＢＡＸ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ—Ｃ１８色谱（４．６　ｍｌｎ×１５０　ｍｍ，５　ｐｚｍ）；流动相为乙腈一水（ＷＶ＝３０：７０）；检测　波长为２７０　ｎｍ；流速１　ｍｌ／ｍｉｎ。按淫羊藿苷峰计算理论板数应　不低于１　５００。　２．１．２标准曲线的制备精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成　每毫升含４０　ｇ的对照品储备液。临用时配成不同浓度对照品　液，精密吸取对照品溶液１０　，按设定的色谱条件制定标准曲　线，结果显示在０．０９～２３　ｇ／ｍｌ的浓度范围内，淫羊藿苷的吸收　度（Ｙ）与浓度（ｘ）呈良好的线性关系，其回归方程为Ｙ＝０．０３８　７　＋０．０００　１（ｒ＝０．９９９　９）。５次的日内精密度和日间精密度分　别为１．７４％和２．１１％。　２．１．３供试品溶液的制备提取所得药液２　ｍｌ，置分液漏斗中，　用醋酸乙酯萃取４次，１０　ｍｌ／次，合并醋酸乙酯层。蒸干，残渣用　‘实验药材为１８４．４　ｇ　１０　甲醇溶解，滤过，即得。　２．１．４样品的检测精密吸取供试品溶液１０　，注入液相色谱　３讨论　仪，测定。峰面积代入标准曲线，计算各供试品中淫羊藿苷的　淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿苷类、黄酮类等，此类成分　含量。　易溶于水、甲醇、乙醇等溶媒，故可采用乙醇回流法、碱提取法、水　２．２渗漉实验设计依据《中华人民共和国药典）２００５版Ｉ部所　提醇沉法等方法提取，但水提醇沉法浓缩时间过长，有效成分破　录照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法　。按处方比例称取药材　坏大，且无效杂质成分多。碱提取法因提取或浓缩过程中会发生　１８４．４　ｇ，用３０％，５０％，７０％乙醇作溶剂，浸渍４８　ｈ后，以１～３　碱性水解，引起苷类成分水解使有效成分提取量减少，而乙醇回　ｍｌ／ｍｉｎ的速度缓缓渗漉，收集渗漉液。以总淫羊藿苷收率作为　流法浓缩时间较短，ｐＨ值适中，苷类成分损失较少。因此，根据　考察指标，结果显示３种条件下淫羊藿苷含量分别为４６．５７，　有关资料和预实验，我们采用渗漉法和乙醇回流法提取淫羊藿的　５８．４６和６４．３２　ｍｇ。根据实验结果可知补肾益精颗粒渗漉提取的　有效成分，并通过正交设计实验对主要影响因素进行了研究，优　最佳工艺为用７０％乙醇作溶剂，浸渍４８　ｈ后，以１～３　ｍｌ／ｍｉｎ的　选出最佳提取工艺条件。由实验结果分析可知，渗漉提取消耗大　速度缓缓渗漉。　量酒精，耗时长，应选择乙醇回流提取法，影响淫羊藿苷提取的主　２．３　回流法正交实验设计回流提取过程中，综合考虑影响提取　次因素为Ａ＞Ｄ　Ｃ＞Ｂ，即乙醇浓度＞提取次数＞提取时间＞溶　效果的多种因素，采用乙醇浓度（Ａ），溶媒用量（Ｂ），提取时间　媒用量。最佳回流工艺为：Ａ　Ｄ　Ｃ　Ｂ　，验证实验进一步证明该工　（Ｃ）及提取次数（Ｄ）等因素（见表１）进行考察，按　（３　）正交设　艺稳定可行，因此筛选得到的最佳提取工艺条件为：用８倍量　计进行试验　Ｊ，以淫羊藿苷收率作为考察指标，对最佳回流提　５０％乙醇，提取１次３　ｈ。　取工艺进行优化筛选。结果见表２。　表１　回流法正交实验因素水平　参考文献：　［１］　陈洪宝，李彩荣，杨庆胜，等．高效液相色谱法测定元胡止痛片中　延胡索乙素的含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（９）：１７０１．　［２］江永南，姚彩霞，黄趣碧．淫羊藿黄芪口服液的工艺研究［Ｊ］．广东　药学，２０００，１０（４）：２７．　［３］　国家药典委员会．中国药典，Ｉ部［ｓ］．北京：化学工业出版社，　２００５：１０１．　［４］　张雪琼，石召华，熊富良．正交实验法优选胆舒的提取工艺［Ｊ］．　淫羊藿苷乙醇回流法的实验结果及方差分析（表２）可知，影　时珍国医国药，２００６。１７（４）：５９１．　响淫羊藿苷提取的主次因素为Ａ＞Ｄ＞Ｃ＞Ｂ，即乙醇浓度＞　［５］　程建明，井山林．延胡索中延胡索乙素不同提取方法的比较研究　提取次数＞提取时间＞溶媒用量。最佳回流工艺为：Ａ　Ｄ　Ｃ　Ｂ　。　［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（７）：１２３６．　・２５０７・