阿霉素脂质体的制备及抗肿瘤活性研究

２０１５年　４月　第３６卷　第２期　首都医科大学学报　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｐｉｔａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ａｐｒ．２０１５　ＶｏＬ　３６　Ｎｏ．２　［ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－７７９５．２０１５．０２．００１］　・纳米制剂研究・　阿霉素脂质体的制备及抗肿瘤活性研究　李飞阳　崔纯莹　王玉记　吴建辉　（１．首都医科大学化学生物学与药学院药剂学系，北京１０００６９；２．首都医科大学化学生物学与药学院药物化学系，　北京１０００６９）　【摘要】　目的开发一种新型阿霉素脂质体制剂。方法采用膜分散法制备阿霉素脂质体；采用噻唑蓝比色法（ＭＴＦ法）考察　阿霉索和阿霉素脂质体对５种人类肿瘤细胞株增生的抑制作用；以荷Ｓ１８０小鼠为模型，考察阿霉素和阿霉素脂质体的抗肿瘤活　性。结果膜分散法适用于制备阿霉素脂质体，其平均包封率高于９５％；阿霉素制备成脂质体仍具备抑制肿瘤细胞株增生活　性，并呈现时间依赖关系；动物实验表明，阿霉素脂质体的抗肿瘤活性比阿霉素强，毒性比阿霉素低。结论脂质体包封率高，简便易行，重现性好，并且显示了较好的抗肿瘤活性。　【关键词】　阿霉素脂质体；肿瘤细胞增生；释放曲线；抗肿瘤活性　【中图分类号】Ｒ　９６５．１　此法制备的阿霉素　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｏｆ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ　Ｌｉ　Ｆｅｉｙａｎｇ　，Ｃｕｉ　Ｃｈｕｎｙｉｎｇ　，Ｗａｎｇ　Ｙｕｊｉ　，Ｗｕ　Ｊｉａｎｈｕｉ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｒｒｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｃｉａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｐｉｔａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｒｉｎｇ　１０００６９，　Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｐｉｔａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００６９，Ｃｈｉｎａ）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐｏｓｏｍａｌ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ　ｉｌｆｍ　ａｓｓａｙ，ｌｏａｄｅｄ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｅｉｎ　ｂｙ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ａｎｔｉ—ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ａｎｄ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ　ａｇａｉｎｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ＭＴｒ　ａｓｓａｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｅｉｎ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ａｎｄ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｅｉｎ　ｏｎ　Ｓ１　８０　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｄｏｘｏｍｂｉｃｉｎ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　９６．３％ａｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ．　Ｄｏｘｏｒｕｂｉｅｉｎ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｅｉｎ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ａｎｄ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｅｉｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｐｒａｃｔｉｃａｂｌｅ　ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｅｉｎ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｈａｖｉｎｇ　ｇｏｏｄ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｐｏｔｅｎｃｙ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】ｄｏｘｏｒｕｂｉｅｉｎ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ；ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ；ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｃｕｒｖｅ；ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　阿霉素（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ，ＤＯＸ）是由放线菌的发酵液　肿瘤药物阿霉素包封于脂质体中。考察在各介质中　中提取的重要的氨基糖苷类抗肿瘤药物，广泛用于治　ＤＯＸ的释放能力，并评价抗肿瘤活性，为进一步研究　疗血液系统癌症、实体瘤和肉瘤¨Ｊ。阿霉素是明确的　脂质体剂型积累实验基础。　ＤＮＡ嵌插剂，通过芳香平面结构嵌入到ＤＮＡ双螺旋　结构的碱基对之间，抑制ＤＮＡ拓扑异构酶ＩＩ，终止　观遗传反常　Ｊ。由于心脏毒性大，阿霉素的临床剂量　１材料和方法　ＤＮＡ转录　Ｊ。此外，阿霉素还可导致ＤＮＡ损伤和表　１．１材料与仪器　ＤＯＸ（浙江海正药业股份有限公司）；ＤＭＥＭ培　ｏｎｅ公司，美国）；胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ公司，美　与疗效也大受限制。脂质体作为药物输送系统，具有　养基（ＨｙＣｌ改善药物的药代动力学、体内分布和降低毒性的优　国）；卵磷脂、胆固醇、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、　点。文献　报道蒽环霉素脂质体包封率高，治疗原发　四甲基偶氮唑盐（Ｍａｒ）、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）（Ｓｉｇｍａ　性和转移性乳腺癌的活性好、心脏毒性低。本文将抗　公司，美国）；其他试剂均为分析纯。肿瘤细胞ＭＣＦ一　基金项目：“十二五”重大新药创制科技重大专项（２０１１ＺＸ０９３０２－００７－０１）。Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇｓ　Ｃｒｅａｔｉｏｎ　Ｐｌａｎ　Ｓｐｅｃｉａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｍａｊｏｒ（２０１１ＺＸ０９３０２－００７－０１）．　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ．Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｕｊｉａｎｈｕｉ０１＠１２６．ｔｏｎｉ　网络出版时间：２Ｏ１５一ｏ４—１０　０８：４２网络出版地址：ｈｔｔｐ：∥ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／１１．３６６２．ｒ．２０１５０４１０．０８４２．００９．ｈｔｍｌ　１５８　首都医科大学学报　第３６卷　７、Ａ３７５、ＨｅｐＧ２、ＳＹＨＹ５Ｙ、Ｈｅｌａ（由中国医学科学肿瘤　发／发射波长，测定荧光光谱，并绘制荧光标准曲线。　细胞库购进，自行传代，中国）；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ培养板（聚碳　２）ＤＯＸ脂质体体外释放和血浆稳定性：取２　ｍＬ．　酸酯膜，９６孔，Ｃｏｓｔａｒ公司，美国）；Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｇ５０（Ｓｉｇ—　ＤＯＸ脂质体放入透析袋内两头夹紧，置于３５　ｍＬ　ｐＨ　ｍａ公司，美国）；透析袋（ＭＷ　１２　０００－１４　０００）（Ｓｉｇｍａ　为７．４或６．８的ＰＢＳ缓冲液中透析。并于３７℃的恒　公司，美国）；孔径分别为０．８　ｍ、０．４５　Ｉｘｍ、０．２　ｍ　温振荡器中振荡（１４０　ｒ／ｍｉｎ），于１、２、４、６、１２、２４、４８、　的聚碳酯膜（Ｗｈａｔｍａｎ公司，美国）；Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ　Ｒｅａｄ．　７２　ｈ取５　ｍＬ透析液ｉ贝０定荧光强度，计算ＤＯＸ脂质体　ｅｒ、酶标仪、ＵＶ－２２００ＰＣ荧光分光光度计（尤尼可公　的累积释放量。　司，日本）；聚碳酯膜过滤器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司，美国）。　１．２方法　１．２．１　ＤＯＸ脂质体的制备　采用经典的薄膜分散法制备空白ＤＯＸ脂质体。　分别称取处方量的２０　ｍｍｏｌ卵磷脂、２９　ｍｍｏｌ胆固醇、　１０　ｍｍｏｌ　ＤＰＰＣ、４０　ｍｍｏｌ　ＤＯＰＥ和１　ｍｍｏｌ　ＰＥＧ，置于茄　瓶中加入适量氯仿溶解。超声３０　Ｓ使其充分混合均　匀。用旋转蒸发仪减压浓缩除去氯仿，经４０℃真空干　燥过夜。加入适量２５０　ｍｍｏＬ／Ｌ硫酸铵溶液将脂膜水　化。充氮气，在５Ｏ℃水浴中温育、超声。采用硫酸铵　梯度法载人ＤＯＸ，取脂质体悬浮液１０　ｍＬ置于透析袋　中，在磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，ｐＨ７．４，２Ｌ）中进行透析。脂　质体囊泡经过聚碳酯膜（膜孔直径分别为０．８　ｔｘｍ、０．４５　ｘＩｍ、０．２　ｍ）依次挤压后形成带有硫酸铵梯度的空白　单室脂质体。在调节至１０　ｍｇ／ｍＬ的空白脂质体中逐　滴加入含１　ｍｇ／ｍＬ　ＤＯＸ的水溶液，使药脂比为１０：１，　混匀，水浴４０℃孵育２０　ｒａｉｎ，即得ＤＯＸ脂质体。　１．２．２　ＤＯＸ脂质体表征与包封率　取制备的ＤＯＸ脂质体用激光粒度测定仪测定其　粒径分布和Ｚｅｔａ电位。测定温度为２５℃，平衡时间　为９　ｍｉｎ，介质折光率为１．３４７　１，黏度为１．１４８　ｍＰａｓ。　取０．２　ｍＬ脂质体加于Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ５０凝胶柱顶部，　用水洗脱，流速０．６７　ｍＬ／ｍｉｎ，收集脂质体部分洗脱液，　每管洗脱液用１０％（体积分数）曲拉通定容至５　ｍＬ，采　用荧光分光光度法测量ＤＯＸ浓度。根据ＤＯＸ脂质体　的洗脱曲线，计算包封率。包封率（％）＝（上柱后脂质　体中ＤＯＸ量／上柱前脂质体中ＤＯＸ量）ｘｌＯ０％。　１．２．３　ＤＯＸ脂质体体外释放及血浆稳定性　１）ＤＯＸ荧光标准曲线：精密称取ＤＯＸ标准品１０　ｍｇ，置于１００　ｍＬ量瓶中，加ＰＢＳ溶解并定容至刻度，　即得浓度为１００　ｇ／ｍＬ的ＤＯＸ标准储备液。精密吸　取０．１、０．２、０．５、１．０、２．０、４．０、６．０　ｍＬ　ＤＯＸ标准储　备液加至１０　ｍＬ容量瓶中，ＰＢＳ定容至１０　ｍＬ，混匀即　得浓度为１．０、２．０、５．０、１０．０、２０．０、４０．０和６０．０　ｇ／　ｍＬ的ＤＯＸ标准液。以Ｅｘ／Ｅｍ（４７０　ｎｍ／５９４　ｎｍ）为激　取小鼠血浆适量，离心取上清，标记相应时间点，　在１　ｍＬ的血清中加入１００　ｍＬ脂质体０．１　ｍＬ和　同等量的ＤＯＸ溶液，放置于３７℃中。在相应时间点　终止反应，测定其荧光强度。　１．２．４　ＤＯＸ脂质体抗肿瘤细胞增生活性测定（ＭＴＦ　法）［　］　将对数生长期的人肝癌细胞ＨｅｐＧ：、人宫颈癌细　胞ＨｅＬａ、黑色素瘤细胞Ａ３７５、人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７　和人神经母细胞瘤细胞ＳＨＳＹ５Ｙ细胞按每孔３　０００～　４　０００个接种于９６孔板中，４～６　ｈ后分别加入不同终　浓度的ＤＯＸ和ＤＯＸ脂质体，每组设６复孔，在３７℃，　５％ＣＯ：条件下培养２４、４８、７２　ｈ后，每孔加入２５　Ｍｒｒ（５　ｍ￣／ｍＬ）继续培养，４　ｈ后吸掉上清液，每孔加　入１５０　Ｌ　ＤＭＳＯ，在４９０　ｎｍ波长下检测每孑Ｌ吸光度　（Ａ）值。计算细胞增生抑制率。　细胞抑制率％＝（１一实验组Ａ值／对照组Ａ值）Ｘ　１００％。采用回归方程式分别求出５株细胞对ＤＯＸ　游离药和ＤＯＸ脂质体的半数抑制浓度（ＩＣ轴）值，以上　过程重复３次。　１．２．５测定ＤＯＸ与ＤＯＸ脂质体抗肿瘤活性　１）荷Ｓ１８０肿瘤小鼠模型：取腹腔接种Ｓ１８０腹水瘤　第８天的ＩＣＲ小鼠，乙醚麻醉后脱颈椎处死，用７５％乙醇　消毒后置于超净台内，用镊子夹起腹部中线偏右的皮肤　并剪一小口至可见乳白色腹水流出。将吸管由开口处轻　轻插入腹腔吸出腹水，１　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ。弃去上清　液后，残留物加９　ｍＬ灭菌０．９％氯化钠注射液，吹打均匀　后，１　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ，弃去上清液。向试管底部的　乳白色胶状物中加９　ｍＬ灭菌０．９％氯化钠注射液，用吸　管轻轻吹气，使瘤细胞均匀分散。经台盼兰染液于显微　镜下计算活细胞的个数。将原液中的存活瘤细胞稀释成　１．５ｘ１０　＋／ｍＥ，用于接种。用２％碘酒棉球和７５％乙醇　棉球在小鼠右侧腋下消毒，并注入０．２　ｍＬ瘤细胞液，缓　缓抽出针头。按此方法给每只ＩＣＲ种小鼠接种后采用数　字表法随机分组（每组１５只），放入动物室饲养。　２）给药方法：于接种第２天开始按照如下给药方　１６０　首都医科大学学报　第３６卷　表１　ＤＯＸ和ＤＯＸ脂质体对肿瘤细胞增生的抑制作用　Ｔａｂ．１　Ａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ＤＯＸ　ａｎｄ　ＤＯＸ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ＤＯＸ：ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ；ＩＣｓｏ：５０％ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｈｏｎ・　脂质体缓慢释放ＤＯＸ不会降低ＤＯＸ的疗效，却会降　为９５％以上，１个月内的泄漏率小于５％。体外释放　低ＤＯＸ的毒性。　度实验表明ＤＯＸ脂质体有一定的缓释作用。虽然　从心指数指标上看，２　Ｉｘｍｏｌ／ｋｇ　Ｄ０Ｘ组经２４　ｈ给ＤＯＸ从透析袋释放速度快，４　ｈ就已经释放了９０％，　药后，心指数与０．９％氯化钠注射液组差异有统计学　而ＤＯＸ脂质体释放速度较慢，１２　ｈ才释放８５％。血　意义（Ｐ＜０．０１），而ＤＯＸ脂质体（２　Ｉｘｍｏｌ／ｋｇ，２４　ｈ）与　浆稳定性实验表明，ＤＯＸ脂质体可以稳定存在于小鼠　０．９％氯化钠注射液组比较差异无统计学意义，说明　血浆，１２　ｈ释放度不足３０％。在￥１８０小鼠模型上，　ＤＯＸ有明显的心脏毒性，将ＤＯＸ制备成脂质体后心ＤＯＸ脂质体的抗肿瘤活性略高于ＤＯＸ本身，毒性则　脏体质量比无明显变化，表明有效地降低了心脏毒　明显低于ＤＯＸ。　Ｉ】士｛羊同事　～　表２　ＤＯＸ和ＤＯＸ脂质体的抗肿瘤活性　。　４参考文献～　、　Ｔａｂ．２　Ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｉｔｅｓ　ｏｆ　ＤＯＸ　ａｎｄ　ＤｏＸ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　［１］　［Ｎｏ　ａｕｔｈｏｒｓ　ｌｉｓｔｅｄ］．Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ　Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ｄｒｕｇ　Ｒｅｆ－　ｅｒｅｎｃｅ　Ｂｒａｙｆｉｅｌｄ　Ａｌｉｓｏｎ（Ｅｄ）Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ　Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ｄｒｕｇ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ￡４５９　４。６８８ｐｐ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ　９７８０８５７１１１３９５　０８５７１１１３９６［Ｆｏｒｍｕｌａ：ｓｅｅ　ｔｅｘｔ］［Ｊ］．　Ｅｍｅｒｇ　Ｎｕｒｓｅ，２０１４，２２（５）：１２．　［２］Ｐｏｍｍｉｅｒ　Ｙ，Ｌｅｏ　Ｅ，Ｚｈａｎｇ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．ＤＮＡ　ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｂｙ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｄｒｕｇｓ　ＮＳ：ｎｏｒｍａｌ　ｓａｌｉｎｅ；ｎ＝１５，　Ｐ＜０．０１　ＮＳ　ｇｒｏｕｐ；Ａ　Ｐ＜０．０５　［Ｊ］．Ｃｈｅｍ　Ｂｉｏｌ，２０１０，１７（５）：４２１－４３３．　▲▲Ｐ＜０．０１　２　Ｉ￣ｍｏｌ／ｋｇ　４８　ｈ　ｉｎｔｅｒｖａｌ　ＤＯＸ；ＤＯＸ：ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ　［３］Ｐａｎｇ　Ｂ，Ｑｉａｏ　ｘ，Ｊａｎｓｓｅｎ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｄｒｕｇ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｉｓｔｏｎｅ　ｅ—　表３　ＤＯＸ和ＤＯＸ脂质体对心脏指数的影响　ｖｉｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｏｐｅｎ　ｃｈｒｏｍａｔｉｎ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａ—　Ｔａｂ．３　Ｔｈｅ　ｈｅａｒｔ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｄ０Ｘ　ａｎｄ　ＤＯＸ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　（ｎ＝１５）　ｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｃｏｍｍｕｎ，２０１３，４：　１９０８－１９０８．　［４］Ｌａｏ　Ｊ，Ｍａｄａｎｉ　Ｊ，Ｐｕ＆ｔｏｌａｓ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ　Ｄｏｘｏｒｕｂｉ—　ｃｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ：ａ　ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．　Ｊ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖ，２０１３，２０１３：４５６４０９．　［５］Ｗａｎｇ　Ｙ，Ｋａｎｇ　Ｇ，Ｌｉｕ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｖｅｌ　ｐｏｔａｓｓｉｕｍ　Ｎ一［（２Ｓ，　３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２，３，４，５，６－ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｌｈｅｘ一１一ｙ１］一Ｌ—ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎａｔｅｓ（ＩＩ）ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ＮＳ：ｎｏｒｍａｌ　ｓａｌｉｎｅ；　Ｐ＜０．０１　ＮＳ　ｇｒｏｕｐ；ＤＯＸ：ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ　ｌｏｗ　ｓｉｄｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｅｔａｌｌｏｍｉｃｓ，２０１２，４（５）：４４１－４４７．　３讨论　［６］Ｌｉ　Ｓ，Ｗａｎｇ　Ｙ，Ｚｈａｏ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．ＢＰＩＣ：Ａ　ｎｏｖｅｌ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ｌｅａｄ　ｃａｐａｂｌｅ　ｏｆ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｆｒｅｅ　本研究采用硫酸铵梯度法制备得到了ＤＯＸ脂质　ｒａｄｉｃａｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　Ｌｅｔｔ，２０１５，２５（５）：１１４６—　体。该脂质体在电镜下观察为圆形小球，用粒径测　１１５０．　定仪测定的粒径约为２００　ｎｍ，Ｚｅｔａ电位约为一２０～　（收稿日期：２０１４—１２－０８）　一４０　ｍＶ。硫酸铵梯度法制备的ＤＯＸ脂质体的包封率　编辑陈瑞芳