白血病的分子生物学诊断研究进展

山东医药２０１　１年第５１卷第３５期　质量和考虑经济学角度出发，肝癌高危筛查以半年ｌ　７欠较为　合　。　［３］李修蕾，莫盂生，黄锦超，等．肝癌高危人群筛查的ｌ临昧意义　［Ｊ］．广西医学，２００５，２７（１１）：１７２９—１７３１．　２．３　９　查的社会经济效益　有学者研究年轻人肝癌（４０岁　以下）的临床特征，预后和患者牛存的分析后得…结论，肝癌　的早期筛查很有必要，能够很大程度上改善预后，尤其对于　乙肝表面抗原阳性患者。对ＨＢｓＡｇ阳性者实施一年２次的　［４］陈钦艳，董柏青，杨进业，等．广西隆安县ＨＢｓＡｇ阳性１｝千　』ｔ随　访研究［Ｊ］．中国热带医学，２００９，９（５）：８０７—８０９．　［５　ｊ　Ｍａｓａｔｏｓｈｉ　Ｋ．Ｅａｒｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｏｔ　ｃｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｍｕｈｉｓｔｅｐ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａ｜ｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　血检和Ｂ超（彩超）复查。对ＡＦＰ异常者实施临Ｊ木随访复　奄，结果提示３　ａ筛查使早期诊断率达７０．３１％　。另有研　究表明每半年的筛查能减少３７％的肝癌病死率…　。杨秉辉　等¨　的研究认为筛查组中生存３　ａ以＿Ｉ：的病例皆得益于筛　查带来的早期发现、早期诊断、早期治疗结果。　张博恒等¨　研究结果表明：①肝癌患者的早期发现、早　［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００６，４９（１－２）：６４．　［６］陈建国，陆建华，张永辉，等．甲胎蛋白的现场应用　啼查进展　［Ｊ］．中国肿瘤，２００９，１８（８）：６０９￣５】２．　［７］黄天壬，张振权，余家华，等．广　农村肝癌岛发现场开展肝癌　“三早”筛查的研究［Ｊ］．Ｊ　西医科大学学报，２００８，２５（２）：３１２—　３ｌ３．　［８］陈金洋，杨秉辉，周杏无，等．社区肝癌高危人群筛查问隔时间的　探索［Ｊ］．中国肿瘤，２００１，１０（４）：２０１—２０２．　［９］Ｗｕｎ　ＹＴ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ　ＪＡ．Ａｌｐｈａ—ｆｃｔｏｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ／ｏｒ　ｌｉｖｅｒ　ｕｌｔｒａｓｏｎ—ｏｇ—　Ｔａｐｈｙ　ｆｏｒ　ｌｉｖｅ　ｅａｎｅｅｒ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｌｆ￣ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　期治疗可延长患者生命，为社会创造更多的效益；②选取发　病率高的人群是保证筛查效果的重点之一。在男性高危对　象中筛查，可减低医疗成本，又可获得良好的效果。对女性　高危对象中是否筛查应慎重。提高依从性可明显增加筛查　的效果，所以推广肝癌筛查在目前医疗资源有限的情况下，　既可合理利用医疗资源，又可很大程度降低肝癌的病死率。　总之，在肝癌高危人群ＨＢｓＡｇ阳性者，特别是ＡＬＴ、Ｂ超　［Ｊ］．Ｃｏｅｈｒａｎｅ　Ｄａｔａｂａｓｅ　Ｓｙｓｔ　Ｒｅｖ，２００３，（２）：ＣＤ００２７９９．　［１０］Ｂｒｕｉｘ　Ｊ，ＨｅｓｓｈｅｉｍｅｒＡＪ，ＦｏｒｎｅｒＡ，ｅｔ　ａ１．Ｎｅｗ　ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｅｉｎｏｎｍ【Ｊ　ｊ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００６，２５　（２７）：３８－４８．　异常且ＡＦＰ阳性者进行肝癌筛查，能及时发现早期肝癌；通　过积极治疗可明显提高远期生存率。　参考文献：　［１］Ｓｅｕｎｇ　ＫＹ．Ｒｅｃｅｎｔ　ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕ—　ｌａｒ　ｅａｒｃｉｎｏｎｌａ　ｂａｓｅｌ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００８，５Ｉ（３４）：８．　［１　１］Ｚｈａｎｇ　Ｂｉｄ，Ｙａｎｇ　ＢＨ，Ｔａｎｇ　ＺＹ．Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｔｒｉａｌｏｆｓ　ｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｆｏｒ　Ｈｅｐａｔｏ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｎｌａ【Ｊ］．Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　Ｃｌｉｎ　Ｏｎ—　ｃｏｌ，２００４，１３０（７）：４ｌ７４２２．　［１２］杨秉辉．原发性肝癌的二级预防［Ｊ］．中国临床医生，２００２，３０　（１０）：１９－２０．　［１３］张博恒，杨秉辉．原发性月ｔ　癌筛查的成本效果分析ｆ　Ｊ］．ｒｆ＿Ｉ国Ｉ临　床医学，１９９９，６（２）：１０６—１０８．　（收稿Ｌ】期：２０１１　４）５—１８）　［２］张博恒，杨秉辉．上海市肝癌高危人群监测方案实施评估［Ｊ］．　中国肿瘤，２００１，１０（４）：１９９－２００．　白血病的分子生物学诊断研究进展　张耀辉　（淄博市中心医院，山东淄博，２５５０３６）　关键词：白血病；分子生物学；诊断　中图分类号：Ｒ７３３．７　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—２６６Ｘ（２０１１）３５－０１１１－０２　白血病是一类常见和多发的造血干细胞克隆性恶性疾　病，形态学分型为其主要诊断方法，但对于一些形态不典型　的病例易误诊。近年来临床研究发现，大部分的白血病存在　着某种染色体易位，而易位会产生新的融合基因、癌基因的　扩增、原癌基因点突变或抑癌基因的失活等。分子生物学技　术应用于白血病的基因诊断已成为研究热点，现将其研究进　展综述如下。　性，既可以直接对个体基因状态进行检测，又可以对表型正　常的携带者以及特定疾病的易感者作出诊断和预测　。　在分子水平诊断白血病主要针对特定的染色体易位和　易位形成的融合基因，如急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＩ　Ｌ）　Ｍ２ｂ型存在ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合基因，为ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）易　位所产生；Ｍ３型存在ＰＭＬ／ＲＡＲｃ￣融合基因，是ｔ（１５；１７）　（ｑ２２；ｑ２１）易位所产生的；慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）存在　的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因由ｔ（９；２２）（ｑ３４；ｑｌ１）易位所产生的；急　性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）则存在ＩｇＨ、ＴＣＲｙ、ＴＣＲ８等基因重　排。髓系细胞白血病和急性淋巴细胞白血病的重排基因以　１　诊断策略　基因诊断是利用分子生物学的技术方法检测受检者体　内ＤＮＡ或ＲＮＡ的结构或者水平的变化，从而对疾病作出诊　断的方法…。与传统方法相比较，其具有非常显著的优越　及融合基因为分子生物学诊断白血病提供了分子靶标，使其　】】】　医药　Ｏ１１年第５ｌ卷第３５期　能有效进行白血病的分型诊断、微小残留病（ＭＲＤ）的监测　及疗效评价　Ｊ。　２诊断方法　瘤进行更精确的分型分类，并可预测肿瘤的治疗效果和预　后。　随着人类基因组测序的完成，借助基因芯片技术，目前　可得到不同类型肿瘤的转录基因表达谱（ＧＥＰ）。近年来，应　用基因芯片技术进行白血病的ＧＥＰ研究报道较多，但用于　临床诊断的基因芯片尚未问世，仍处于研究探索阶段。目前　一２．１荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ）　目前ＦＩＳＨ广泛用于检测　染色体重组和标记染色体，检测多种基因疾病的染色体微缺　失和用于非整倍体疾病的产前诊断　］。其基本原理是用　标记了荧光素、生物素或者地高辛的单链ＤＮＡ探针和与其　互补的ＤＮＡ退火杂交，通过检测附着在玻片上的分裂中期　个国际性肿瘤合作研究组（ＭＩＬＥ）正在对基因芯片在白血　病诊断分型方面的可靠性、敏感性和特异性进行评估，其有　望改变白血病的诊断和分类格局，甚至成为白血病分子分型　的必备工具　Ｊ。　综上所述，ＦＩＳＨ、ＲＱ—ＰＣＲ或基因芯片检测融合基因和　或间期细胞上的核ＤＮＡ位置反映相应基因的状况。适用于　多种临床标本（如血液、骨髓、组织印片和体液，甚至石蜡包　埋的组织标本等），具有直观、方便、敏感、可量化、方法多样　和适应不同检测目的等优点，目前在血液学领域中得到越来　越广泛的应用，尤其是在白血病诊断、治疗监测、预后评估和　微小残留病检测等诸方面为不可缺少的重要手段。　目前，可通过检测已经被克隆的染色体易位累及的融合　基因对白血病进行分子诊断。常见的单一序列探针有ＰＭＬ／　ＲＡＲｃ￣、ＡＭＬ１／ＥＴＯ、ＢＣＲ／ＡＢＬ和ＴＥＬ／ＡＭＬ１等。但是为了　方便起见，商品化的探针可为多标记的，即两个基因分别用　两种颜色进行标记，同时在一张玻片标本上进行杂交，可大　大提高检测效率。间期ＦＩＳＨ技术检测的是单个细胞水平上　的染色体异常，可提供白血病负荷的数量指标，且可反映各　期细胞的白血病残留状态，因此在国际上被广泛运用。杜庆　锋等　应用双色双融合间期荧光原位杂交（Ｄ—ＦＩＳＨ）探针对　移植后或经供者淋巴细胞输注治疗获完全细胞遗传学缓解　的慢性粒细胞白血病患者骨髓内残留的微小肿瘤负荷水平　进行检测，结果显示Ｄ　ＦＩＳＨ具有很好的灵敏度及特异性，可　重复性高，并且检测到的阳性结果与ＲＴ—ＰＣＲ结果高度相　关。　２．２实时荧光定量ＰＣＲ技术（ＲＱ—ＰＣＲ）　ＲＱ—ＰＣＲ技术是　在常规的ＰＣＲ反应体系中加入荧光染料或者荧光标记探　针，然后通过荧光定量ＰＣＲ仪检测ＰＣＲ过程中荧光强度的　变化情况，再根据标准品的ｃｔ值（即ＰＣＲ扩增过程中，荧光　信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次　数）来建立标准曲线，最后通过标准曲线对未知模板进行定　量分析的方法。其具有灵敏、特异、技术成熟和操作简便等　优点，检测白血病融合基因结果准确稳定，对于临床上明确　诊断、具体分型、动态观测肿瘤负荷、选择合适治疗方案、评　估治疗效果和预后都有较大价值。姜艳梅等　对ＲＱ—ＰＣＲ　进行了方法学评价，在应用其检测急性髓系白血病ＡＭＬ１／　ＥＴＯ融合基因时，结果显示６例阴性ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合基因　标本均呈现阴性，说明其特异性好，可重复性高。Ｕｃｋｕｎ　等　在用不同方法检测ＡＬＬ患儿的ｔ（４；１１）染色体易位时　发现，Ｐ，Ｑ．ＰＣＲ既具有较核型分析和巢式ＲＴ—ＰＣＲ更高的敏　感性，又可定量分析。　２．３基因芯片技术基因芯片技术是将大量探针有序地固　定在固相支持物上，与待测样本中的多种类核酸按碱基配对　原则进行杂交，再通过电子计算机控制点样和图像扫描硬件　及软件分析，迅速得出待测样本生物信息的分子生物学和遗　传学结果的方法。其优越性为能够在基因表达水平上对肿　１１２　基因重排，可用于白血病和微小残留病（ＭＲＤ）分子生物学　监测，在恶性血液病诊治中发挥着越来越重要的作用，尤其　对一些骨髓形态学检查并不十分典型的白血病，通过检出其　特征性染色体的改变，可提高疾病的诊断率。白血病的分子　生物学诊断既可以弥补形态学（Ｍ）、免疫学（Ｉ）和细胞遗传　学（ｃ）检查的不足，又能够发现新的亚型。白血病相关基因　的分子生物学检测不仅诊断达到分子水平，而且可以了解患　者的白血病细胞负荷情况，并及时制订合适的治疗方案，极　具临床应用价值。　参考文献：　［１］府伟灵．基因诊断治疗与预测医学［Ｊ］．第三军医大学学报，　２００９，３１（１）：２４－２５．　［２］Ｚｅｃｈｉ—Ｃｅｉｄｅ　ＲＭ，Ｊｅｓｕｓ—Ｏｌｉｖｅｉｒａ　ＮＡ，Ｇｕｉｏｎ．Ａｌｍｅｉｄａ　ＭＬ，ｅｔ　ａ１．　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＣＯＬ２Ａ１　ｇｅｎｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎ　２１　Ｂｒａｚｉｌｉａｎ　ｆａｍｉ－　ｌｉｅｓ　ｗｉｔｈ　Ｓｔｉｃｋｌｅｒ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ，ｆｕｒｔｈｅｒ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ／ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏ－　ｓｉｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｍｅｄ　Ｇｅｎｅｔ，２００８，５１（３）：１８３—１９６．　［３］Ｃａｍｐａｎａ　Ｄ．Ｍｉｎｉｍａｌ　ｒｅｓｉｄｕａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｐａｔｂｏｌ，２００４，１２２（１）：４７．　［４］Ｐｉｎｋｅｌ　Ｄ，Ｌａｎｄｅｇｅｎｔ　Ｊ，Ｃｏｌｌｉｎｓ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｆｌｕｏｒｅｓｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉ—　ｄｉｓａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｈｕｍａｎ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｌｉｂｒａｒｉｅｓ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒｉｓｏ一　ｙ　２１　ａｎｄｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｍｏｅｓ　４［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　ＮａｔｌＡｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，１９８８，８５（２３）：９１３８－９１４２．　［５］Ｋｕｗａｎｏ　Ａ，Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ　ＳＡ，Ｄｏｂｙｎｓ　ＷＢ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｃｒｙｐｔｉｃ　ｔｒａｎｓｌｏｅａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｍｉｌｌｅｒ・・Ｄｉｃｋｅｒ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｂｙ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉ－　－ｄｉｓａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｈｕｍ　Ｇｅｎｅｔ，１９９１，４９（４）：７０７－７１４．　［６］杜庆锋，刘晓力，宋兰林，等．双色双融合间期荧光原位杂交探　针检测慢性髓系白血病的微小残留病状态［Ｊ］．中华内科杂志，　２００２，４１（１２）：８０１—８０４．　［７］姜艳梅，袁宏，刘新光，等．应用实时荧光定量ＲＴ—ＰＣＲ检测急性　髓系白血病患者ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合基因的临床意义分析［Ｊ］．中　国实验血液学杂志，２００９，１７（１）：１７－２２．　［８］Ｕｃｋｕｎ　ＭＦ，Ｈｅｒｍａｎ—Ｈａｔｔｅｎｋ　Ｋ，Ｃｒｏｔｔｙ　ＬＭ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉ‘　ｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｍＵ－ａｆ１　ｆｕｓｉｏｎ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｂｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ａ　ｃｙｔｏ。　ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ　ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ　ｔ（４，１　１）（ｑ２１，ｑ２３）ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ　ｔｒａｎｓｌｏｃａ‘　ｔｉｏｎｆＪ１．Ｂｌｏｏｄ，１９９８，９２（３）：８１０－８２１．　［９］Ｈａｆｅｒｌａｃｈ　Ｔ，Ｋｏｈｌｍａｎｎ　Ａ，Ｂａｃｈｅｒ　Ｕ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｒｏｆｉ＿　ｌｉｎｇ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２００７，９６　（４）：５３５－５４０．　（收稿日期：２０１１－０３—１８）