水产动物疾病学综合实验2015(精)

水产动物疾病学综合实验安排

水产动物疾病学综合实验指导 一、 实验目的与要求：

1. 水产动物疾病学综合实验是为了满足现代水产养殖行业对生产、培养科研技术操作人员的需要，使学生掌握水产动物疾病学的基本知识及基本技能，同时培养学生的创新、创业及社会服务能力，成为水产养殖行业防病治病的技术人才。

2. 通过实验了解水产动物疾病种类及其特点；能较准确地诊断水产动物疾病。 3. 能正确地使用渔药，能有效地防治水产动物疾病。 二、 实验内容： 1. 现场调查；

2. 渔药使用：泼洒法；挂袋挂篓法；口服法； 3. 显微镜诊断疾病； 4. 寄生虫标本的收集与染色； 三、 实验操作及其步骤： 1. 现场调查：

池塘是水生动物生存的基础，疾病的发生除了由病原生物直接感染和侵袭外，首先应了解池塘周围的环境和水体物理、化学因素的变化对养殖生物发病的影响。发病现场的调查可为全面查明发病原因，及时发现和正确判断病鱼提供依据。

① 调查发病养殖水体环境和发病史

发病养殖水体环境是指养殖水体周围有哪些工厂，工厂是否排放污（废）水，这些污（废）水是否含有对鱼类有毒的物质，是否经过处理后排放等。同时，还要着重强调调查养殖水体情况，了解放养前清塘的方法、清塘药物的剂量、清塘

后放养鱼种的时间、鱼种消毒的药量等。这些与养殖生物疾病的发生关系较大，同时还应了解养殖水体近几年发生疾病的危害程度，以及所采用的防治方法和效果等。

② 了解池塘水质状况

水温 水温是养殖生物疾病发生的重要因素，水温高低与疾病的发生和流行有着密切的关系。一般病毒性鱼病和细菌性鱼病，在水温为25~30℃时传染性最强，32℃以上和18℃以下时感染减弱。因此江苏、浙江和湖南、湖北一带，每年5~6月和8~9月份是细菌病、病毒病流行高峰。暴发性鱼病需要需要的水温范围较大，流行的时间也更长些。有些寄生虫病，如车轮虫病和指环虫病是夏季危害鱼苗、鱼种的流行病，而有些疾病如水霉病、小瓜虫病、斜管虫病和鱼波豆虫病，通常在20℃以下发病，属于低温季节的流行病。

A. 谁的酸碱度（pH ） 由于高密度养殖，池塘有机质多氢离子浓度微偏高（pH 偏低），易发生水霉病。酸性水也常常引起嗜酸性卵甲藻病的暴发。在氢离子浓度较低（pH 较高）的盐碱养殖水体，水温较低时易大量繁殖三毛金藻，分泌毒素，致使池鱼中毒死亡。

B. 溶解氧 水中含氧量的多少关系到养殖生物的生长和生存，同疾病的发生有明显的相关性。正常池塘的溶解氧含量要求4毫克/升，最低不能低于1毫克/升，对于各种不同的鱼类和不同的生长阶段，因其生理需求不一样而对溶氧的需求不同。溶解氧长时间过低会影响鱼类生长，降低鱼体的抗病能力，同时为病原菌的繁殖，生长创造了条件。

C. 检测水质 对发病水体进行水的pH 、溶解氧、氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐、硬度、化学耗氧量的分析，了解水质的基本营养盐变化情况，对可能因环境因子致病的因素应根据具体情况选择分析。

③ 调查饲养管理情况

A. 了解鱼种放养情况: 放养数量过多就会出现相互拥挤、摄食不足、生长不良的现象，导致养殖生物体对疾病的抵抗能力降低，有利于病原菌的感染和传播。夏花培育至冬片鱼种一般亩放养量为7000~10000尾。

B. 了解投饲和施肥状况: 投喂的饲料不新鲜或不按照“四定”投喂，鱼类很容易患细菌性肠炎病。夏天在池塘内施用不经发酵的有机肥，易使池塘水质恶化、缺氧、并促使致病菌核寄生虫大量繁殖。

C. 了解养育过程中的生产操作情况: 在养殖生产过程中往往由于放养鱼种、运输和拉网操作不慎，造成鱼体受伤，使细菌、真菌和寄生虫等病原体乘机侵入伤口，引起多种鱼病，如赤皮病、白皮病、白头白嘴病、水霉病等。因此，了解发病池塘水温、酸碱度、溶解氧的变化以及饲养管理和环境因子，对正确查明疾病的发病原因，及时合理拟定防治方案是很重要的。

2. 渔药使用：

⑴ 泼洒法：

又称遍洒法，是药物防治鱼病时最常用的一种方法。通常采用对某些病原生物有杀灭作用，而对鱼无害的药物，在鱼池中全池遍洒，使药物达到一定的浓度，以杀灭鱼体表和水体中的病原生物，用以防治鱼病的方法称为泼洒法。泼洒时应尽量均匀泼洒，在上风处泼洒效果好。

⑵ 挂袋挂篓法:

其原理是将药物装在有微孔的器具中，使其在水中缓慢溶解，在池水中人为营造一定的药物区域，使养殖对象在能忍受的药物浓度范围内，利用其摄食过程主动地进入药物区域，接受药物治疗，达到杀灭或驱除体表和鳃部及药物有效作用区域病原体的目的。A. 挂篓法：是将100－150克漂白粉装入一个带盖的小竹楼中，每个食场悬挂3－6个竹楼在食场框架上，悬挂深度大约在水表层20－30厘米处，每天换药1次，每次消毒连挂3天。B. 挂袋法：是将100克硫酸铜、40克硫酸亚铁装入一个质地细密的布袋中对食场进行消毒的方法。技术要点: ① 食物周围的药物浓度不宜过低或过高。浓度过低，鱼虽来吃食，但不能杀灭病原体；浓度过高，鱼不来吃食，也达不到防治鱼病的目的。所以挂药后注意观察，及时调整药袋(篓 数量或增减药量。② 食物周围药物浓度的保持时间，一般应不短于2～3小时，否则对迟来的鱼就不能起到消毒的作用此外，鱼每次在食场停留时间短暂，一次不能全部杀灭病原体，需经多次反复。为了达到这一目的，在下雨天和刮大风时不应使用，以免药物有效浓度保持时间太短，宜选择天气好、风浪小时使用。③ 为了让鱼类在挂药后仍能前来摄食，可在挂药前停食1～2天。在用药的几天内，选择投喂鱼类适口饵料，或在投喂饲料中添加诱食剂，所投饵料量应比平时少，以保证鱼在次日仍能到食场吃食。④ 应选择对鱼有趋向反应的药物挂袋(篓 ，不选用回避反应的药物。并控制药量不超过遍洒药量，鱼池开启增氧

机和注排水时应提起药袋(篓 。 ⑶ 口服法 :

口服法是把药物混入饵料投喂，它具有用药量少，操作方便，不污染环境，对不患病鱼，虾类不产生应激反应等特点。常用于增加营养，病后恢复及体内病原生物感染，特别是细菌性肠炎病和寄生肠虫病。但其治疗效果受养殖动物病情轻重和摄食能力的影响，对病重者和失去摄食能力的个体无效，对滤食性和摄食活性生物饵料的种类也有一定的难度。

口服给药的用量计算要考虑到鱼池中能摄食同一饵料的各种鱼，如做成药饵投喂发病的草鱼，必须考虑到草鱼、鲤鱼也会摄食。用药拌草投喂时应考虑到同池中鳊鱼也会摄食。药饵可根据鱼的生活习性制作，如草鱼应使用浮性药饵，将药物拌入到米糠和面粉（或榆树粉）中，米糠和面粉的药物的比例为3:1，充分拌匀后加热水调和，捏成软硬适度的块状，或压成药条或切成小块，晾干投喂。用于青鱼、鲤鱼的药饵要将药物拌入菜饼粉及面粉（或榆树粉）中。菜饼粉和面粉药物比例为5:1，充分拌匀后加热水调和，按上法制成沉性颗粒投喂。如用药物拌青饲料投喂，可将少量面粉用温水调和煮成糊状，冷却后拌入药物，再与嫩青草拌和，晾干后投喂 。

3. 显微镜诊断疾病：

由于疾病的发生情况比较复杂往往存在多种并发症，肉眼通常局限于观察疾病的外表症状和大型寄生虫引起的鱼病，则需要经过显微镜检查。

① 体表：用解剖刀刮取少许黏液置于载玻片，加滴适量的蒸馏水盖上盖玻片，放在显微镜下检查是否有寄生虫。

② 鳃丝：用小剪刀剪取一小块鳃组织放在载玻片上，加滴适量的蒸馏水盖上盖玻片，放在显微镜下检查是否有寄生虫和异常变化。

③ 肠道：剖开腹腔取出肠道，剪开肠管，分别取前、中，后三段肠壁上的少许黏液置于载玻片上，滴上适量的生理盐水，加盖玻片放在显微镜下检查。寄生在肠道内的寄生虫有黏孢子虫、球虫、肠袋虫、六鞭毛虫以及复殖吸虫、绦虫和线虫的虫卵。

④ 镜检注意事项

a 检查鱼体（刚死或未死的病鱼）和取出的各器官要保持湿润。 b 检查器官用过的解剖工具，须洗净、消毒后再用。 c 使用显微镜时，先用低倍镜后用高倍镜检查。没有显微镜也可用倍数较 高的放大镜。 d 检查病鱼的尾数与肉眼检查相同。 ⑤ 各种病原体的计数 传染性鱼病。如草鱼出血病、烂鳃病、白皮病、赤皮病等。按病状的严重 程度分别用“+”表示轻微； “++”表示较重； “+++”表示严重。还需用文字 描述病状的情况。 原生动物的个体小，并且不同种类个体大小差异有很大，纤毛虫、毛管虫 在低倍显微镜（10×10）视野下有 1-20 个虫体记“+” ； 21~50 个记“++” ，51 个以上记“+++” 。小瓜虫除按上面标准计数外，如计算囊泡时，则可用文字说 明。鞭毛虫、变形虫、孢子虫则以显微镜的高倍（10×40）视野为单位，具体 标准同上。胞囊的计数。用文字说明。 单殖吸虫、线虫、绦虫、棘头虫、甲壳动物、软体动物的幼虫，在 50 个 一下均以数字说明，例如，一片鳃，一段肠子里的虫体数。 （低倍显微镜为 10 ×8；高倍显微镜为 10×40。病原体的数量，用载玻片镜检时，都是以同一玻 片中观察 3 个视野的平均标准） 4. 寄生虫标本的收集与染色： ⑴ 车轮虫 收集：载玻片收集。车轮虫常寄生在鱼的鳃和体表，当在显微镜（10×10） 下观察到车轮虫时， 取下盖玻片， 将载玻片晾干， 贴上标签， 放入载玻片盒即可。 染色：硝酸银染色法：主要是用染车轮虫的齿环等结构。 具体操作：是把空气中晾干的涂片（载玻片） ，平放于桌上，用吸管吸取 2% 硝酸银液滴于涂片上， 将涂片移到近窗口光线强处 （避免直射阳光） 0.5～1 小时， 然后弃掉片子上的染液， 用清水轻轻冲去硝酸银液。放入清水中泡洗 1～2 小时， 取出晾干，对于染色较好的切片用中性树胶封固。 6

（2）锥体虫 收集：载玻片收集。锥体虫常寄生在鳝鱼的血液中。当在显微镜（10×10） 下 观察到锥体虫时，取下盖玻片，将载玻片晾干，贴上标签，放入载玻片盒即 可。 染色：吉姆萨染色法。 具体操作：将在空气中晾干的血液涂片（载玻片） ，放在甲醇中固定 5 分钟， 取出，让它在空气中晾干。然后将稀释的吉姆萨染色液滴在涂片上，静置 2 小时 以上，弃掉染色液，用中性水（即蒸馏水和自来水各半混合）冲洗 0.5～1 分钟， 取出晾干， 然后镜检， 如果染色过深， 用

85%的酒精褪色 0.2～0.5 分钟， 再镜检。 对于染色较好的切片用中性树胶封固。 （3）复殖吸虫、绦虫、棘头虫 收集：载玻片压片法收集。复殖吸虫、绦虫、棘头虫等通常寄生在鱼类的肠 或胃中，有的肉眼可见；有的则需在低倍显微镜（10×10，10×4）或解剖镜下 观察，用镊子或解剖针小心挑取虫子，放到载玻片上，然后将另一载玻片轻轻压 上，用细线系好，放入 70%酒精中固定，第二天补加 70%酒精。 染色：步骤 ① 水化：由 70%酒精中取出标本退至 50%酒精→30%酒精→蒸 馏水，每一阶段约 10-15 分钟。② 用硼砂洋红染色。染色 4～6 小时后，水洗。 用自来水慢慢冲洗至少 1～2 分钟（或多次换水） 。 ③ 脱水：自 30%酒精→50%→70%→80%→90%→95%（Ⅰ）→95%（Ⅱ） →100%（Ⅰ）→100%（Ⅱ）→1/2100%酒精+1/2 二甲苯，每一阶段需停留 10～ 15 分钟。时间也要延长一些。标本愈大，每一次脱水阶段停留的时间也要增长。 从 100%酒精开始，松开载玻片，放入无水酒精（Ⅱ）1/2 无水酒精+1/2 二甲苯 接着升至纯二甲苯中，到虫体透明为止。 ④ 封片：虫体透明后，挑取虫体迅速滴入中性树胶，盖上盖玻片，待中性 树胶阴干后，贴上标签，装入载玻片盒。 （4）中华鳋、锚头鳋、鱼虱 7

收集：在收集这类虫子时要小心，不能损坏虫体。固定前，标本应充分洗涤 干净用 4%的福尔马林固定，第 2 天换液，并用 4%的福尔马林保存。 染色：步骤 ①水洗，24~48 小时，去除福尔马林。或用自来水慢慢冲洗 2 小时（或多次换水）以上； ② 用硼砂洋红染色。染色 4～6 小时后，水洗。用 自来水慢慢冲洗至少 1～2 分钟（或多次换水） 。 ③ 脱水：自 30%酒精→50%→70%→80%→90%→95%（Ⅰ）→95%（Ⅱ） →100%（Ⅰ）→100%（Ⅱ）→1/2100%酒精+1/2 二甲苯，每一阶段需停留 15～ 20 分钟。时间也要延长一些。标本愈大，每一次脱水阶段停留的时间也要增长。 从 100%酒精开始，松开载玻片，放入无水酒精（Ⅱ）1/2 无水酒精+1/2 二甲苯 接着升至纯二甲苯中，到虫体透明为止。 ④ 封片：虫体透明后，挑取虫体迅速滴入中性树胶，盖上盖玻片，待中性 树胶阴干后，贴上标签，装入载玻片盒。 5. 药品的配置 ① 吉姆萨染液：适于染血液涂片 吉姆萨液 蒸馏水 缓冲液 3～5 毫升 3 毫升 1 毫升 其缓冲液 pH 为 6.4，配法： 磷酸二氢钾 磷酸二氢钠 蒸馏水 6.63 克 2.56 克 1000 毫升 吉姆萨液的配法是：取吉姆萨粉剂 0.76 克，溶于 60℃的 50 毫升甲醇中，然后加 入 60℃的甘油 50 毫升。不断地搅拌。混合均匀。

并放在干燥箱中过滤，其过滤 液即为母液。 ② 各种浓度的酒精：市上出售的普通酒精，通常浓度是 95%。 如需要各种不 同的浓度，可自行配制。如要配 50%的酒精，可量 50 毫升的酒精，加入 45 毫升 的蒸馏水即成。如果要配制 70%的酒精，可量 70 毫升 95%的酒精，加入 25 毫 8

升的蒸馏水即成。其余各种浓度可依此类推。 ③ 福尔马林溶液：福尔马林又称甲醛溶液，市售一般含甲醛 36-40%，但在配 制各种浓度的福尔马林液时，都是以市售福尔马林为 100%。所以，要配制 5% 福尔马林，取 5 毫升市售的福尔马林溶液，加 95 毫升水即成。配置 10%福尔马 林液，取 10 毫升甲醛液，加入 90 毫升的水即成。 ④ 硼砂洋红：用于染完整寄生虫。 洋红 4%的硼砂水溶液 70%酒精 1-2 克 100 毫升 100 毫升 将洋红加入硼砂水溶液中。煮开至完全溶解，然后加入酒精，静置数天过滤， 即可使用。 9