transwell共培养的小室膜上要铺胶不呢?我用0.4um的孔径，铺什么胶呢？ 我用的是密理博的悬挂式
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发布时间：2022-04-23 09:39
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时间：2023-10-09 19:13
细胞迁移实验步骤（Neuroprobe的使用方法）
1．膜预处理
将48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾胶原置于50ml的离心管。在膜的粗糙面用铅笔做标记，放入上述溶液中4度过夜。
实验前将膜取出，放入装有PBS的培养皿中漂洗一遍，再用饥饿培养基洗一遍，吸去培养基后加入新的饥饿培养基，放入37度培养箱中。
2. 处理细胞
将细胞消化，调浓度1×105个/ml，细胞迁移装置下层加入166μl含有刺激因子的饥饿培养基。小心铺好膜（粗面朝下），装好塑料垫，固定上层装置。上层加入100μl细胞悬液，迁移4-6h。
3. 固定
小心将膜取下来，在用PBS弄湿的滤纸上挂掉光滑面的细胞，在新的滤纸上粗面朝上放置，彻底晾干。然后再甲醇里粗面朝上固定5min，彻底晾干。
4. 染色
粗面朝下置于结晶紫染液中30min，取出膜用双蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在载玻片上，数细胞。
这个方法比transwell方便。与boyden chemper法类似。
Transwell法的步骤：
先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。如新的小室省略此步。下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%（还是1%记不清了）的明胶室温放置20-30分钟。这是将细胞消化下来，调浓度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。小室上还未干的明胶甩掉，加细胞放入24孔板里。放入细胞培养箱培养4-6小室。拿出小室甩掉里边的培养基。小心擦尽小室里边的细胞（不能碰外边）。将小室放入装有600ml结晶紫的24孔板染色1小时。移到空的24孔板后即可在显微镜下观察了。
