无菌检查法抑细菌和抑真菌试验

发布网友 发布时间：2024-10-24 11:19

我来回答

共1个回答

热心网友 时间：2024-11-05 19:11

在进行无菌检查之前，通过直接接种法，可以评估供试品的抑菌和抑真菌作用。为此，需准备四管需气菌培养基、四管厌气菌培养基以及两管真菌培养基。在每种培养基中接种金黄色葡萄球菌、生孢梭菌、白色念珠菌各两管，其中一管接种供试品规定量，所有培养物置于规定温度下培养3至5天。如果所有培养基管在24小时内微生物均良好生长，则说明供试品无抑菌作用。若供试品管与对照管比较，微生物生长微弱、缓慢或不生长，则可判定供试品具有抑菌作用。之后，需通过稀释法、中和法或薄膜过滤法处理供试品，以消除其抑菌性质后，再进行接种。

无菌检查法主要包括直接接种法和薄膜过滤法。直接接种法适用于非抗菌作用的供试品，而薄膜过滤法则适用于具有抗菌作用或大容量的供试品。在操作时，需使用适当的消毒液对供试品容器表面或外包装进行消毒，然后采用无菌方法取内容物。对于无菌检查中，应同时操作阴性对照，以确保实验结果的准确性。

直接接种法中，根据供试品的不同类型，采取适当的准备方法。例如，注射液、滴眼剂或灭菌溶液取规定量供试品混合；注射用无菌粉末或无菌冻干品取规定量加入无菌水或0.9%无菌氯化钠溶液制成供试品溶液；外科敷料取规定量剪取供试品样本，肠线、缝合线取最小包装样本，外科器具取样本浸没于适量培养基中；青霉素类药品取规定量供试品，加入无菌青霉素酶溶液混合；放射性药品取规定量供试品接种于培养基中。

在操作过程中，将备妥的供试品分别接种于需气菌、厌气菌和真菌培养基中。需气菌、厌气菌培养基置于30至35℃，真菌培养基置于20至25℃，培养7天。在此期间，每日观察并记录是否有菌生长。阳性对照管应在24小时内有菌生长。如供试品管出现浑浊且无法判断是否为菌生长，可将培养液转种至同种新鲜培养基或斜面培养基上，细菌培养2天，真菌培养3天，观察是否有菌生长。也可使用接种环取培养液涂片染色，用显微镜观察是否有菌。

薄膜过滤法适用于具有抗菌作用的供试品。取规定量供试品，按药品说明处理后，加入无菌氯化钠溶液或其他适宜溶剂至少100ml，混合后通过孔径不大于0.45μm的薄膜过滤器。用0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜溶液冲洗滤膜，然后将需气菌、厌气菌和真菌培养基加入薄膜过滤器内或取出滤膜分成三份，分别加入培养基中，按相应温度和时间培养。阳性对照管应加入相应对照菌液1ml（抗细菌药物用金黄色葡萄球菌，抗厌氧菌药物用生孢梭菌，抗真菌药物用白色念珠菌）。

结果判断中，若阳性对照管显浑浊并确有细菌生长，阴性对照管呈阴性，且需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽显浑浊但证明并非有菌生长，应判为供试品合格。反之，若任何1管显浑浊并确证为有菌生长，则需重新取2倍量供试品复试，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。

无菌检查法系指检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的 其他品种是否无菌的一种方法。 无菌检查在洁净度100级单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作,防 止微生物污染。单向流空气区与工作台面，必须进行洁净度验证。 生物制品的无菌检查，应按《中国生物制品规程》中有关无菌检查的规定办理。